Pimienta E, Rodríguez S, Fando R, Serrano Y, Ortega D, Palenzuela A, Marrero K

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 55
Paginas: 1-25
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RESUMEN

Introducción: Las vacunas contra el virus del papiloma humano (VPH) se fundamentan en la proteína principal de la cápsida L1.
Objetivo: Clonar el gen L1 del VPH-18 a partir de una paciente cubana infectada con VPH-18 y expresar las variantes de longitud completa y delecionadas del gen L1 del VPH-18 en Escherichia coli.
Métodos: El gen L1 del VPH-18 de longitud completa se amplificó por PCR a partir de ADN total aislado de un paciente cubana, se clonó y finalmente se subclonó en el vector de expresión de E. coli pET26b. Se construyeron tres mutantes de deleción, que codifican para proteínas truncadas que carecen de 30 aminoácidos por el extremo carboxilo, en combinación con 5, 6 o ningún residuo delecionado por el extremo amino. La producción de las proteínas L1 en E. coli BL21(DE3) y E. coli SHuffle T7 se evaluó mediante SDS-PAGE y Western blot. Resultados: El gen L1 del VPH-18 clonado fue 99.9 % similar a la variante africana EF202152 y probablemente comparte un origen común con el linaje B del genotipo 18. Las tres variantes truncadas de la proteína L1 del VPH-18 se produjeron a mayores niveles que la proteína L1 del VPH-18 de longitud completa, alcanzando mayores niveles en E. coli BL21(DE3) y mayor solubilidad en E. coli SHuffle. La variante truncada solo por el extremo carboxilo, L1C30, se produjo a niveles similares a las proteínas L1 del VPH-18 truncadas por ambos extremos. E. coli SHuffle produjo aproximadamente tres veces más cantidades de L1C30 cuando creció en condiciones de autoinducción, con respecto a la inducción convencional y, por ende, las cantidades fueron comparables a las obtenidas por E. coli BL21(DE3) bajo inducción convencional. Conclusiones: La truncación de treinta residuos de aminoácidos por el extremo carboxilo de la proteína L1 del VPH-18 tuvo una importante contribución a la producción y solubilidad de la proteína L1 nativa en E. coli. Este es el primer informe sobre la producción soluble de la proteína L1 del VPH-18 en una cepa de E. coli SHuffle. Sin embargo, se necesitan mayores cantidades de la proteína L1 para escalar su producción para desarrollar un candidato vacunal contra el VPH.

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