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2014, Número 1

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Biotecnol Apl 2014; 31 (1)


Proteínas híbridas recombinantes de pertactinas tipo 1 y 2 de Bordetella pertussis son más inmunogénicas en ratones que las moléculas originales

Quintana-Vázquez D, Coizeau E, Alvarez A, Delgado M, Cárdenas T, Ramos Y, Chinea G, Berbers GAM, Guillén GE

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 33
Paginas: 33-42
Archivo PDF: 342.22 Kb.


RESUMEN

En este estudio se exploró el concepto de moléculas híbridas de pertactina (PRN) para inmunizar contra Bordetella pertussis. Se diseñaron nuevas moléculas mediante un método aditivo/inclusivo que comprendió las secuencias completas/regiones de dos pertactinas (Prn). Las moléculas PRN portan las dos regiones variables R1 de Prn1 y Prn2. Se clonaron los genes de Prn1, Prn2 y seis variantes de PRN en Escherichia coli. Las PRN se sobre-expresaron a 25-35 % de la concentración de proteínas totales, con el uso del sistema de expresión pET28a/BL21 Codonplus RP. Se purificaron por el método de afinidad His-tag /Ni-NTA proteínas con más del 90 % de pureza, con rendimientos de 8-10 mg/g de biomasa. Tras la reconstitución, las PRN fueron reconocidas por anticuerpos monoclonales anti-Prn contra epitopos y regiones conformacionales y lineales, involucrados en la respuesta inmune protectora. Un panel de 10 sueros de individuos reactivados con una vacuna comercial reaccionaron con las moléculas PRN a niveles similares a los obtenidos con la proteína P.69. Las proteínas PRN fueron altamente inmunogénicas en ratones Balb/c, e indujeron respuesta de anticuerpos IgG2a e IgG2b. Dos proteínas PRN (PRN2-lc-1 › PRN2-1) indujeron niveles significativos de anticuerpos (p ‹ 0.05) contra epitopos localizados en el extremo N-terminal inmunodominante y en la región variable R1. Estas dos proteínas mostraron un perfil de respuesta potenciada de anticuerpos (anticuerpos IgG totales antiPrn) en ratones Balb/c comparadas con los controles de Prn. PRN2-lc-1 y PRN2-1 son valiosos candidatos para evaluaciones posteriores in vivo, como parte de formulaciones de vacunas acelulares.


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