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2019, Número 1

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Enf Infec Microbiol 2019; 39 (1)


Validación de una técnica de PCR múltiplex para la detección de Vibrio cholerae toxigénica

Quino W, Pompa IJ, Zamudio ML, Aguilera C, Juscamayta E, G Gavilán R

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 27
Paginas: 19-27
Archivo PDF: 792.88 Kb.


RESUMEN

El cólera es una de las enfermedades diarreicas más graves, responsable de causar al menos siete pandemias en el mundo. Entre los factores de virulencia asociados a esta enfermedad se encuentra la toxina del cólera, codificada por el gen ctxA y el pilus corregulador de toxina codificado por el gen tcpA, que juega un papel importante en la patogenicidad.
Objetivo. Validar una técnica de pcr múltiplex para el diagnóstico de Vibrio cholerae toxigénica basado en la detección de los genes Vc-m, ctxA y tcpA.
Métodos. La validación de la técnica se realizó en el Laboratorio de Enteropatógenos, del Instituto Nacional de Salud, a partir de ensayos de PCR convencional (Vc-m) y PCR múltiplex (ctxA-tcpA), así como la estandarización del PCR múltiplex con tres blancos (Vc-m/ ctxA/tcpA). La validación se realizó con 51 aislados clínicos de Vibrio cholerae toxigénica (ctxA) y 31 cepas de distintos géneros no productora de ctxA. Se determinó el rango de trabajo, la selectividad, la robustez, la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo y el valor predictivo positivo de la técnica.
Resultados. Se validó la metodología y se obtuvo un rango de detección que abarca de la dilución 10-0 a 10-2. La robustez fue óptima al modificar diferentes variables. Se obtuvo 100% de inclusividad, exclusividad, precisión analítica, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo, así como la sensibilidad y especificidad.
Conclusiones. La estandarización y posterior validación de la PCR múltiplex (Vc-m/ctxA/tcpA), realizada por operadores distintos, corroboró los parámetros considerados y confirmó la repetibilidad y reproducibilidad de la técnica, por lo tanto provee una técnica rápida, precisa, segura y selectiva para la identificación de cepas de Vibrio cholerae toxigénica de aislados clínicos luego de un aislamiento primario.


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