Actividad levanasacarasa pero ausencia de acumulación de fructanos en plantas transgénicas de caña de azúcar obtenidas mediante un procedimiento optimizado de bombardeo de callos embriogénicos

Alexander Banguela; Raisa Rodríguez; Juan G Arrieta; Carmen Menéndez; Elizabeth Kairúz; Luis E Trujillo; Lázaro Hernández

2011, Número 4

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Biotecnol Apl 2011; 28 (4)

Actividad levanasacarasa pero ausencia de acumulación de fructanos en plantas transgénicas de caña de azúcar obtenidas mediante un procedimiento optimizado de bombardeo de callos embriogénicos

Banguela A, Rodríguez R, Arrieta JG, Menéndez C, Kairúz E, Trujillo LE, Hernández L

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Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 26
Paginas: 216-220
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RESUMEN

La caña de azúcar (Saccharum spp. hybrid) es un cultivo ideal para la producción transgénica de fructanos a altos niveles debido a su marcada eficiencia en fijar el carbono atmosférico y almacenar sacarosa. Como otras gramíneas, es recalcitrante a la transformación genética. En este trabajo se optimizó la transformación de caña de azúcar cv. C1051-73 por la vía del bombardeo de callos embriogénicos. El empleo de los genes de la proteína verde fluorescente potenciada (eGFP) y la neomicina fosfotransferasa II (nptII), ambos bajo el control del promotor Ubi-1 de maíz, permitió la detección temprana de los eventos de transformación y la selección de transformantes estables, respectivamente. La entrada del ADN a la célula fue más eficiente en los callos bombardeados a 11 cm de distancia y presión de argón de 90 PSI, y no presentaron daños drásticos. El incremento de la concentración de geneticina de 20 mg/L en el estadio de callos, a 25 mg/L en los pasos de formación de brotes previno la generación de plantas falsas positivas o mosaicos. Con el objetivo de producir fructanos en caña de azúcar, se obtuvieron 20 líneas transgénicas portadoras del gen de la levanasacarasa de Gluconacetobacter diazotrophicus (lsdA) fusionado a señales de localización vacuolar. Experimentos de Southern blot y reacción en cadena de la polimerasa confirmaron la presencia del gen quimérico en el genoma de plantas crecidas y ahijadas en el campo. Ninguna planta acumuló levana en las hojas o los tallos maduros, a pesar la detección de actividad levanasacarasa en los extractos foliares de una de las líneas.

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