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2019, Número 1

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Biotecnol Apl 2019; 36 (1)


Expresión de rMnSODSeq recombinante regulada con el promotor autoinducible dps en Escherichia coli

Catur RA, Olga KAR, Retnoningrum DS

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 21
Paginas: 1201-1205
Archivo PDF: 562.40 Kb.


RESUMEN

Expresión de rMnSODSeq recombinante regulada con el promotor autoinducible dps en Escherichia coli. La producción de proteínas recombinantes ha favorecido el uso del promotor T7, fuertemente regulado por IPTG, con alta eficiencia transcripcional en Escherichia coli y para controlar la sobreexpresión de proteínas. Sin embargo, el alto costo del IPTG y su toxicidad celular han llevado a considerar otros sistemas, como los promotores autoinducibles. Uno de estos es el promotor dps, dependiente de la fase de crecimiento y activo en fase estacionaria. En este trabajo se caracterizó la sobreproducción de la proteína rMnSODSeq (23.47 kDa) a partir de la construcción plasmídica pCAD-sod, bajo el control del promotor dps, en E. coli TOP10. Además, se estudió el efecto de las variables Tiempo de incubación y Medio de cultivo, y se determinó el rendimiento de proteína mediante SDS-PAGE analizada con el software ImageJ. La proteína se purificó en una columna de Ni2+-NTA, y la actividad se verificó mediante zimografía. También se evaluó la estabilidad del plásmido en E. coli TOP10 cultivado en medio Luria-Bertani (LB) y Terrific Broth (TB). Las condiciones óptimas de sobreproducción en 200 mL para ambos medios fueron: 37 °C, 150 rpm y 24 h. En TB se obtuvo una mayor densidad celular, mientras que en LB se alcanzó una mayor concentración de rMnSODSeq en proteínas totales (48.70 ± 1.15 %). La proteína se obtuvo con una pureza electroforética superior al 90 %. El análisis de zimografía confirmó la actividad de dismutación de la proteína. El uso del promotor auto-inducible dps en el plásmido pCAD-sod en E. coli TOP10 es prometedor para su escalado.


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