medigraphic.com
ISSN 0185-6014 (Impreso)
Órgano oficial de difusión de la Federación Mexicana de Patología Clínica, AC y de la Asociación Latinoamericana de Patología Clínica/Medicina de Laboratorio

2018, Número 3

<< Anterior Siguiente >>

Rev Mex Patol Clin Med Lab 2018; 65 (3)


Evaluación de una prueba de PCR múltiple para la identificación del ADN bacteriano y fúngico en el diagnóstico de sepsis neonatal

Sánchez HJL, Parra OI, Hernández SC, Pichardo VL, Cruz LA, Villanueva GD, López MB, Villa GM

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 26
Paginas: 167-174
Archivo PDF: 514.31 Kb.


RESUMEN

Introducción: La sepsis es una de las causas de mortalidad en los niños en el mundo, reportándose 7.5 millones anualmente. Dentro del abordaje clínico y de laboratorio son necesarias pruebas rápidas y precisas. Las pruebas de biología molecular son una opción disponible, pero tienen que ser evaluadas. Los sistemas de gestión de calidad y los procesos de mejora continua nos llevan a generar evidencias objetivas en la toma de decisiones y por ello se recomienda la verificación analítica de un método cualitativo para demostrar las especificaciones analíticas del fabricante. Objetivo: Evaluar el desempeño analítico de una prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiple en tiempo real LightCycler® SeptiFast Test Mgrade. Material y métodos: Estudio prospectivo y descriptivo realizado en el Hospital Infantil de México Federico Gómez (HIMFG), de Junio 2015 a Junio del 2017. De la plataforma analítica LightCycler® SeptiFast Test Mgrade. Resultados: El proceso de estandarización de la prueba de LightCycler® SeptiFast Test Mgrade, se realizó con apego a las instrucciones del fabricante. La prueba cuenta con diversos niveles de control, que deben ser incluidos en cada experimento. El control interno (CI) son moléculas de ADN sintético que se agrega en volumen definido a las muestras, y debe ser positivo, mientras que el control negativo (CN) debe ser negativo. Los controles reactivos (CR), de bacterias Gram positivas (G+), Gram negativas (G-) y hongos deben ser positivos. En la fase de estandarización, se realizaron 13 experimentos y, a pesar de reconocer los microorganismos adicionados (cepas ATCC), nos invalida la prueba debido a que, en los controles reactivos, no detecta amplificados de bacterias Gram positivas y/o Gram negativas, mientras que los hongos sí amplificaron. Sin embargo, para que una prueba pueda ser válida analíticamente, todos los controles reactivos deben amplificar. Conclusiones: A pesar de ser una prueba para diagnóstico in vitro (IVD), en las condiciones de infraestructura, equipamiento y trabajo, no fue posible la estandarización y verificación de la prueba de LightCycler® SeptiFast Test Mgrade en el HIMFG, incluso después de realizar 13 experimentos apegados a las instrucciones y en presencia de asesores del fabricante que constataron el estricto seguimiento de éstas. Por lo que concluimos que, aun siguiendo las recomendaciones del fabricante, no resultó una prueba confiable ni clínicamente útil.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. Naciones Unidas. Objetivos de Desarrollo del Milenio. Informe de 2015. Nueva York: Naciones Unidas; 2015. Disponible en: http://www.un.org/es/millenniumgoals/pdf/2015/mdg-report-2015_spanish

  2. López MI, Callao MP, Ruisánchez I. A tutorial on the validation of qualitative methods: from the univariate to the multivariate approach. Anal Chim Acta. 2015; 891: 62-72.

  3. Darmstadt GL, Bhutta ZA, Cousens S, Adam T, Walker N, de Bernis L et al. Evidence-based, cost-effective interventions: how many newborn babies can we save? Lancet. 2005; 365 (9463): 977-988.

  4. Liu L, Johnson HL, Cousens S, Perin J, Scott S, Lawn JE et al. Global, regional, and national causes of child mortality: an updated systematic analysis for 2010 with time trends since 2000. Lancet. 2012; 379 (9832): 2151-2161.

  5. Lawn JE, Cousens S, Zupan J; Lancet Neonatal Survival Steering Team. 4 million neonatal deaths: when? Where? Why? Lancet. 2005; 365 (9462): 891-900.

  6. Flores-Herrera H, Maida-Claros R, Solís-Herrera H, Illescas-Medrano E, Zavala-Díaz de la Serna FJ. Identificación molecular de bacterias causales de sepsis neonatal mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Acta Pediatr Mex. 2009; 30 (3): 148-155.

  7. Ramírez-Sandoval MLP, Macías-Parra M, Lazcano-Ramírez F. Etiología de la sepsis neonatal en una unidad hospitalaria de segundo nivel. Salud pública Méx. 2007; 49 (6): 391-393.

  8. Camacho-Gonzalez A, Spearman PW, Stoll BJ. Neonatal infectious diseases: evaluation of neonatal sepsis. Pediatr Clin North Am. 2013; 60 (2): 367-389.

  9. Vergnano S, Sharland M, Kazembe P, Mwansambo C, Heath PT. Neonatal sepsis: an international perspective. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 2005; 90 (3): F220-F224.

  10. Goldstein B, Giroir B, Randolph A; International Consensus Conference on Pediatric Sepsis. International pediatric sepsis consensus conference: definitions for sepsis and organ dysfunction in pediatrics. Pediatr Crit Care Med. 2005; 6 (1): 2-8.

  11. Fischer JE, Bachmann LM, Jaeschke R. A readers’ guide to the interpretation of diagnostic test properties: clinical example of sepsis. Intensive Care Med. 2003; 29 (7): 1043-1051.

  12. Wellinghausen N, Wirths B, Franz AR, Karolyi L, Marre R, Reischl U. Algorithm for the identification of bacterial pathogens in positive blood cultures by real-time LightCycler polymerase chain reaction (PCR) with sequence-specific probes. Diagn Microbiol Infect Dis. 2004; 48 (4): 229-241.

  13. Chiesa C, Panero A, Osborn JF, Simonetti AF, Pacifico L. Diagnosis of neonatal sepsis: a clinical and laboratory challenge. Clin Chem. 2004; 50 (2): 279-287.

  14. Klausegger A, Hell M, Berger A, Zinober K, Baier S, Jones N et al. Gram type-specific broad-range PCR amplification for rapid detection of 62 pathogenic bacteria. J Clin Microbiol. 1999; 37 (2): 464-466.

  15. CLSI. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline—Second Edition. CLSI document EP12-A2. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.

  16. Ruppenthal RD, Souza Pereira F, Cantarelli VV, SilveiraSchrank I. Application of broad-range bacterial PCR amplification and direct sequencing on the diagnosis of neonatal sepsis. Braz J Microbiol. 2005; 36 (1): 29-35.

  17. Srinivasan L, Harris MC. New technologies for the rapid diagnosis of neonatal sepsis. Curr Opin Pediatr. 2012; 24 (2): 165-171.

  18. Tschiedel E, Steinmann J, Buer J, Onnebrink JG, Felderhoff-Müser U, Rath PM et al. Results and relevance of molecular detection of pathogens by SeptiFast--a retrospective analysis in 75 critically ill children. Klin Padiatr. 2012; 224 (1): 12-16.

  19. Lucignano B, Ranno S, Liesenfeld O, Pizzorno B, Putignani L, Bernaschi P et al. Multiplex PCR allows rapid and accurate diagnosis of bloodstream infections in newborns and children with suspected sepsis. J Clin Microbiol. 2011; 49 (6): 2252-2258.

  20. Jordan JA, Durso MB. Real-time polymerase chain reaction for detecting bacterial DNA directly from blood of neonates being evaluated for sepsis. J Mol Diagn. 2005; 7 (5): 575-581.

  21. Chang SS, Hsieh WH, Liu TS, Lee SH, Wang CH, Chou HC et al. Multiplex PCR system for rapid detection of pathogens in patients with presumed sepsis - a systemic review and meta-analysis. PLoS One. 2013; 8 (5): e62323.

  22. Hernández-Huerta FE, Ruíz-Bedolla E, Cruz-López A, Vilchis-Ordoñez A, Gutiérrez-Almanza Z, López-Martínez B et al. Desempeño analítico de dos plataformas automatizadas para química clínica en un Instituto de Salud Pediátrica. Rev Latinoamer Patol Clin. 2017; 64 (1): 14-26.

  23. Pammi M, Flores A, Leeflang M, Versalovic J. Molecular assays in the diagnosis of neonatal sepsis: a systematic review and meta-analysis. Pediatrics. 2011; 128 (4): e973-e985.

  24. Hernández-Huerta F, Ruiz-Bedolla E, Cruz-López A, Vilchis-Ordoñez A, Almanza-Gutiérrez Z, López-Martínez B et al. Evaluación de plataformas de química clínica mediante la comparación de los resultados de muestras biológicas. Rev Latinoamer Patol Clin. 2017; 64 (4): 169-180.

  25. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Principles and procedures for blood cultures; approved guideline. CLSI document M47-A. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2007.

  26. Pammi M, Flores A, Versalovic J, Leeflang MM. Molecular assays for the diagnosis of sepsis in neonates. Cochrane Database Syst Rev. 2017; 2: CD011926.




2020     |     www.medigraphic.com