Munadziroh E, Purnamasari S, Tri PNN, Soetjipto, Rubianto M, Tirta IW

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 0
Paginas: 2231-2234
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RESUMEN

La inhibición de las actividades de elastasa y metaloproteasa de matriz acelera el proceso de cicatrización de heridas. Se ha informado que el inhibidor de la proteasa de leucocitos secretores humanos (hSLPI) demuestra tal inhibición, promoviendo su uso como biomaterial en la terapia de proteínas. Sin embargo, la biodisponibilidad de SLPI es muy baja y su producción heteróloga en Escherichia coli da lugar a la formación de cuerpos de inclusión, requiriendo etapas de replegamiento para recuperar su bioactividad. La estrategia actual para producir SLPI se ve obstaculizada por la baja recuperación o limitaciones relacionadas con el proceso. Por lo tanto, se desarrolló un enfoque alternativo para conseguir la expresión soluble de la proteína en E. coli. Gene codificación de toda la longitud humana SLPI se generó a partir de la membrana amniótica a través de transcripción inversa PCR. El gen obtenido se insertó entonces en pET-101 / D-TOPO para la expresión en E. coli. La hSLPI recombinante soluble con Histag terminal C se expresó y purificó en una columna de afinidad de níquel. Se ensayó la enzima purificada para la inhibición de la elastasa. La expresión soluble de hSLPI se consiguió con la proteína de longitud completa que contenía su péptido señal nativo. La inhibición de la actividad de la elastasa por la proteína purificada sugiere que la proteína es activa, con una constante de inhibición de ~ 9 x 10-8 M, que está en orden similar de magnitud a la hSLPI parcial. La presencia del péptido señal parece contribuir a la expresión soluble de la proteína y parece tener un efecto insignificante sobre la actividad.