medigraphic.com
ISSN 1870-199X (Impreso)
Órgano oficial de la Facultad de Odontología, UNAM

2017, Número 4

<< Anterior Siguiente >>

Rev Odont Mex 2017; 21 (4)


Evaluación de dos métodos para extracción de ARN en saliva en niños

Vidal MAM, Suárez CA

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 31
Paginas: 245-252
Archivo PDF: 393.28 Kb.


RESUMEN

Objetivo: Estandarizar un protocolo de extracción de ARN en muestras de saliva de niños. Material y métodos: A partir de muestras de saliva provenientes de 60 niños que participaron previa autorización de sus padres. Se compararon dos métodos para extracción de ARN, evaluando concentración, calidad y rendimiento; además se realizó la expresión génica del gen GUSB a través de la técnica RT-PCR (transcriptasa reversa-reacción en cadena de la polimerasa). Los datos fueron analizados mediante medidas de tendencia central y dispersión, frecuencias y porcentajes, para establecer diferencias se utilizaron las pruebas t-Student y χ2 (p ‹ 0.05). Resultados: Al analizar la cantidad de células por mL de saliva se encontró una media de 564,977.8 (DE = 246,678.6); se logró estandarizar un método de extracción de ARN en saliva de niños, específicamente el que utilizó RNeasy® Protect Saliva Mini Kit-Qiagen mostró mejores características de concentración de ARN (p = 0.0000) y rendimiento (p = 0.0000) al compararlo con el que usó QIAzol®; no existieron diferencias en la calidad del ARN (p = 0.146). Conclusión: El ARN pudo extraerse de muestras salivales de niños, por lo cual se sugiere el uso de la saliva para análisis molecular de diferentes enfermedades sistémicas y de la cavidad bucal.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. Haak PT, Busik JV, Kort EJ, Tikhonenko M, Paneth N, Resau JH. Archived unfrozen neonatal blood spots are amenable to quantitative gene expression analysis. Neonatology. 2009; 95 (3): 210-216.

  2. Zhang L, Xiao H, Wong DT. Salivary biomarkers for clinical applications. Mol Diagn Ther. 2009; 13 (4): 245-259.

  3. Zhang L, Farrell JJ, Zhou H, Elashoff D, Akin D, Park NH et al. Salivary transcriptomic biomarkers for detection of resectable pancreatic cancer. Gastroenterology. 2010; 138 (3): 949-57.e1-7.

  4. Dietz JA, Johnson KL, Wick HC, Bianchi DW, Maron JL. Optimal techniques for mRNA extraction from neonatal salivary supernatant. Neonatology. 2012; 101 (1): 55-60.

  5. Wong DT. Salivary diagnostics: amazing as it might seem, doctors can detect and monitor diseases using molecules found in a sample of spit. Am Sci. 2008; 96 (1): 37-43.

  6. Park NJ, Li Y, Yu T, Brinkman BM, Wong DT. Characterization of RNA in saliva. Clin Chem. 2006; 52 (6): 988-994.

  7. Kaufman E, Lamster IB. The diagnostic applications of saliva-a review. Crit Rev Oral Biol Med. 2002; 13 (2): 197-212.

  8. Pfaffe T, Cooper-White J, Beyerlein P, Kostner K, Punyadeera C. Diagnostic potential of saliva: current state and future applications. Clin Chem. 2011; 57 (5): 675-687.

  9. Castagnola M, Picciotti PM, Messana I, Fanali C, Fiorita A, Cabras T et al. Potential applications of human saliva as diagnostic fluid. Acta Otorhinolaryngol Ital. 2011; 31 (6): 347-357.

  10. Park KS. Tgf-Beta family signaling in embryonic stem cells. Int J Stem Cells. 2011; 4 (1): 18-23.

  11. Aps JK, Martens LC. Review: The physiology of saliva and transfer of drugs into saliva. Forensic Sci Int. 2005; 150 (2-3): 119-131.

  12. Lawrence HP. Salivary markers of systemic disease: noninvasive diagnosis of disease and monitoring of general health. J Can Dent Assoc. 2002; 68 (3): 170-174.

  13. Li Y, St John MA, Zhou X, Kim Y, Sinha U, Jordan RC et al. Salivary transcriptome diagnostics for oral cancer detection. Clin Cancer Res. 2004; 10 (24): 8442-8450.

  14. St John MA, Li Y, Zhou X, Denny P, Ho CM, Montemagno C et al. Interleukin 6 and interleukin 8 as potential biomarkers for oral cavity and oropharyngeal squamous cell carcinoma. Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 2004; 130 (8): 929-935.

  15. Madera-Anaya MV. Biomarcadores de cáncer oral en saliva. Av Odontoestomatol. 2013; 29 (6): 293-302.

  16. Li Y, Zhou X, St John MA, Wong DT. RNA profiling of cell-free saliva using microarray technology. J Dent Res. 2004; 83 (3): 199-203.

  17. Juusola J, Ballantyne J. Messenger RNA profiling: a prototype method to supplant conventional methods for body fluid identification. Forensic Sci Int. 2003; 135 (2): 85-96.

  18. Fábryová H, Celec P. On the origin and diagnostic use of salivary RNA. Oral Dis. 2014; 20 (2): 146-152.

  19. Tsui NB, Ng EK, Lo YM. Stability of endogenous and added RNA in blood specimens, serum, and plasma. Clin Chem. 2002; 48 (10): 1647-1653.

  20. El-Hefnawy T, Raja S, Kelly L, Bigbee WL, Kirkwood JM, Luketich JD et al. Characterization of amplifiable, circulating RNA in plasma and its potential as a tool for cancer diagnostics. Clin Chem. 2004; 50 (3): 564-573.

  21. Chiappin S, Antonelli G, Gatti R, De Palo EF. Saliva specimen: a new laboratory tool for diagnostic and basic investigation. Clin Chim Acta. 2007; 383 (1-2): 30-40.

  22. Al Kawas S, Rahim ZH, Ferguson DB. Potential uses of human salivary protein and peptide analysis in the diagnosis of disease. Arch Oral Biol. 2012; 57 (1): 1-9.

  23. Strober W. Trypan blue exclusion test of cell viability. Curr Protoc Immunol. 2001; Appendix 3: Appendix 3B.

  24. Chiang SH, Thomas GA, Liao W, Grogan T, Buck RL, Fuentes L et al. RNAPro•SAL: a device for rapid and standardized collection of saliva RNA and proteins. Biotechniques. 2015; 58 (2): 69-76.

  25. Park NJ, Yu T, Nabili V, Brinkman BM, Henry S, Wang J et al. RNAprotect saliva: An optimal room- temperature stabilization reagent for the salivary transcriptome. Clin Chem. 2006; 52 (12): 2303-2304.

  26. Palanisamy V, Park NJ, Wang J, Wong DT. AUF1 and HuR proteins stabilize interleukin-8 mRNA in human saliva. J Dent Res. 2008; 87 (8): 772-776.

  27. Khabar KS. The AU-rich transcriptome: more than interferons and cytokines, and its role in disease. J Interferon Cytokine Res. 2005; 25 (1): 1-10.

  28. Pandit P, Cooper-White J, Punyadeera C. High-yield RNA-extraction method for saliva. Clin Chem. 2013; 59 (7): 1118-1122.

  29. Maron JL, Johnson KL. Comparative performance analyses of commercially available products for salivary collection and nucleic acid processing in the newborn. Biotech Histochem. 2015; 90 (8): 581-586.

  30. Grabmüller M, Madea B, Courts C. Comparative evaluation of different extraction and quantification methods for forensic RNA analysis. Forensic Sci Int Genet. 2015; 16: 195-202.

  31. Sellin-Jeffries MK, Kiss AJ, Smith AW, Oris JT. A comparison of commercially-available automated and manual extraction kits for the isolation of total RNA from small tissue samples. BMC Biotechnol. 2014; 14: 94.




2020     |     www.medigraphic.com