2004, Número 3
Concordancia de la PCR y métodos rutinarios para el diagnóstico de tuberculosis bovina
Estrada-Chávez C, Díaz OF, Arriaga DC, Villegas-SN, Pérez GR, González SD
Idioma: Español/Inglés
Referencias bibliográficas: 36
Paginas: 225-236
Archivo PDF: 469.03 Kb.
RESUMEN
Se analizó el diagnóstico de tuberculosis bovina (TB) usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en dos grupos de animales: El primero de ellos constituido por 21 bovinos reactores a la tuberculina de una zona endémica de TB y el segundo de 20 animales negativos a la tuberculina, de una zona libre. Los 41 animales se sacrifi caron y se realizó inspección
post mortem, histopatología y cultivo de
Mycobacterium bovis. En el primer grupo, a la histopatología se identifi caron lesiones sugestivas de TB (hematoxilina-eosina) en los 21 casos, 15 de ellos tenían lesiones compatibles (Ziehl-Neelsen positivas) y sólo en 11 se aisló
M. bovis. No se encontraron lesiones en ninguno de los animales del segundo grupo. La histopatología mostró buena concordancia con cultivo, tanto para lesiones sugestivas (valor de Cohen’s Kappa, k = 0.52) como para lesiones compatibles (k = 0.44). En los 41 casos se obtuvo ADN de nódulos linfáticos del tracto respiratorio. Se instrumentó un método de PCR simple dirigido contra un segmento de la secuencia que codifi ca para la proteína MPB70 y se desarrolló una nueva técnica de PCR anidada. La PCR anidada detectó como positivos los 21 casos con lesiones sugestivas de TB (100%). Ambos métodos de PCR mostraron buena concordancia con histopatología (k = 0.44-0.71), pero en el caso del cultivo de
M. bovis ésta sólo se observó con la PCR anidada (k = 0.52). Considerando las lesiones compatibles (ZN) como diagnóstico confirmativo, tanto el cultivo como la PCR simple mostraron 53% de sensibilidad y 88% de especificidad, mientras que la PCR anidada mostró 100% de sensibilidad y 77% de especificidad. La PCR anidada puede permitir la confirmación del diagnóstico de TB en 24 horas.
REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)
De Kantor IN, Ritacco V. Bovine tuberculosis in Latin America and the Caribbean: current status, control and eradication programs. Vet Microbiol 1994;40:5-14.
CANETB, Campaña Nacional contra la Tuberculosis Bovina (Mycobacterium bovis). Disponible en: URL : http://web2.senasica.sagarpa.gob.mx/xportal/dgsa/czoo/Doc468/ 2004
Francis J, Seiler RJ, Wilkie IW, O’Boyle D, Lumsden MJ, Frost AJ. The sensitivity and specificity of various tuberculin tests using bovine PPD and other tuberculins. Vet Rec 1978;103:420-425.
Costello E, Egan JW, Quigley FC, O’Reilly PF. Performance of the single intradermal comparative tuberculin test in identifying cattle with tuberculous lesions in Irish herds. Vet Rec 1997;141:222-224.
NOM-031-ZOO-1995. Comite Consultivo Nacional de Normalización de Protección Zoosanitaria (CONAPROZ), Normas Oficiales Mexicanas en materia de Salud Animal en URL : http://web2.senasica.sagarpa.gob.mx/xportal/dgsa/mrni/Doc222/2004
Whipple DL, Bolin CA, Miller JM. Distribution of lesions in cattle infected with Mycobacterium bovis. J Vet Diagn Invest 1996;8:351-354.
Corner LA. Postmortem diagnosis of Mycobacterium bovis infection in cattle. Vet Microbiol 1994;40:53-63.
Cousins DV, Wilton SD, Francis BR, Gow BL. Use of polymerase chain reaction for rapid diagnosis of tuberculosis. J Clin Microbiol 1992;30:255-258.
Cousins DV, Wilton SD, Francis BR. Use of DNA amplification for the rapid identification of Mycobacterium bovis. Vet Microbiol 1991;27:187-195.
Liebana E, Aranaz A, Mateos A, Vilafranca M, Gomez-Mampaso E, Tercero JC, et al. Simple and rapid detection of Mycobacterium tuberculosis complex organisms in bovine tissue samples by PCR. J Clin Microbiol 1995;33:33-36.
Wards BJ, Collins DM, de Lisle GW. Detection of Mycobacterium bovis in tissues by polymerase chain reaction. Vet Microbiol 1995;43:227-240.
Liebana E, Aranaz A, Francis B, Cousins D. Assessment of genetic markers for species differentiation within the Mycobacterium tuberculosis complex. J Clin Microbiol 1996;34:933-938.
Kent LW, Rahemtulla F, Hockett RD Jr, Gilleland RC, Michalek SM. Effect of lipopolysaccharide and inflammatory cytokines on interleukin-6 production by healthy human gingival fibroblasts. Infect Immun 1998;66:608-614.
Dziadek J, Sajduda A, Borun TM. Specificity of insertion sequence-based PCR assays for Mycobacterium tuberculosis complex. Int J Tuberc Lung Dis 2001;5:569-574.
Payeur J, Jarganin J, Marquart J, Schaper IY, Martin B. Laboratory methods in veterinary mycobacteriology for the isolation an identification of mycobacteria. National Services Laboratories Iowa, USA: United States Department of Agriculture, 1993.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual. 2nd Ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. 1989.
Kocher TD, Thomas WK, Meyer A, Edwards SV, Paabo S, Villablanca FX, et al. Dynamics of mitochondrial DNA evolution in animals: amplification and sequencing with conserved primers. Proc Natl Acad Sci U S A 1989;86:6196-6200.
Radford AJ, Duffield BJ, Plackett P. Cloning of a species-specific antigen of Mycobacterium bovis. Infect Immun 1988;56:921-925.
Harboe M, Nagai S. MPB70, a unique antigen of Mycobacterium bovis BCG. Am Rev Respir Dis 1984;129:444-452.
Fifis T, Plackett P, Corner LA, Wood PR. Purification of a major Mycobacterium bovis antigen for the diagnosis of bovine tuberculosis. Scand J Immunol 1989;29:91-101.
Altman DG. Practical statistics for medical research. London UK: Chapman and Hall; 1991.
Committee on Bovine Tuberculosis. Livestock disease eradication: Evaluation of the cooperative state-federal bovine tuberculosis eradication program. Washington DC, USA: National Academy Press; 1994.
Bauer J, Thomsen VO, Poulsen S, Andersen AB. False-positive results from cultures of Mycobacterium tuberculosis due to laboratory cross-contamination confirmed by restriction fragment length polymorphism. J Clin Microbiol 1997;35:988-991.
Corner L, Melville L, McCubbin K, Small KJ, McCormick BS, Wood PR, et al. Efficiency of inspection procedures for the detection of tuberculous lesions in cattle. Aust Vet J 1990;67:389-392.
Kell DB, Young M. Bacterial dormancy and culturability: the role of autocrine growth factors. Curr Opin Microbiol 2000;3:238-243.
McIlroy SG, Neill SD, McCracken RM. Pulmonary lesions and Mycobacterium bovis excretion from the respiratory tract of tuberculin reacting cattle. Vet Rec 1986;118:718-721.
Norton JH. Tuberculosis-like granulomas in cattle caused by Actinomycetes. Aust Vet J 1976;52:455-457.
Duffield BJ, Norton JH, Hoffmann D. An analysis of recent isolations of Mycobacterium bovis and saprophytic mycobacteria from cattle in northern Queensland. Aust Vet J 1989;66:307-308.
Harboe M, Nagai S. MPB70, a unique antigen of Mycobacterium bovis BCG. Am Rev Respir Dis 1984;129:444-452.
Wood PR, Ripper J, Radford AJ, Bundesen PG, Rylatt DB, Cottis LE, et al. Production and characterization of monoclonal antibodies specific for Mycobacterium bovis. J Gen Microbiol 1988;134:2599-2604.
Fifis T, Plackett P, Corner LA, Wood PR. Purification of a major Mycobacterium bovis antigen for the diagnosis of bovine tuberculosis. Scand J Immunol 1989;29:91-101.
Lightbody KA, Girvin RM, Mackie DP, Neill SD, Pollock JM. T-cell recognition of mycobacterial proteins MPB70 and MPB64 in cattle immunized with antigen and infected with Mycobacterium bovis. Scand J Immunol. 1998;48:44-51.
Al-Attiyah R, Shaban FA, Wiker HG, Oftung F, Mustafa AS. Synthetic peptides identify promiscuous human Th1 cell epitopes of the secreted mycobacterial antigen MPB70. Infect Immun. 2003;71:1953-1960.
Wilesmith JW, Williams DR. Observations on the incidence of herds with non-visible lesioned tuberculin test reactors in south-west England. Epidemiol Infect. 1987;99:173-178.
Estrada-Chávez C, Mancilla R, Arriaga DC, Pérez GR, Díaz OF. Determinación de anticuerpos anti-PPD en hatos lecheros con distintas prevalencias de tuberculosis bovina en México. Veterinaria México 2001; 33:207-211.
Cassidy JP, Bryson DG, Pollock JM, Evans RT, Forster F, Neill SD. Early lesion formation in cattle experimentally infected with Mycobacterium bovis. J Comp Pathol. 1998;119:27-44.