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2004, Número 2

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Vet Mex 2004; 35 (2)


Purificación de cinco isoformas de la hormona luteinizante bovina (bLH). Caracterización fisicoquímica, biológica e inmunológica

Perera MG, Falcón AA, Murcia MC, Hernández CJ, González PE

Idioma: Español/Inglés
Referencias bibliográficas: 38
Paginas: 129-147
Archivo PDF: 419.74 Kb.


RESUMEN

El estudio describe la purificación de cinco isoformas de LH a partir del extracto hipofisario bovino. Las fracciones obtenidas a pH 6.8 y a pH 9.5 de la cromatografía de intercambio catiónico, se repurificaron en condiciones idénticas en DEAE-Sephacel para obtener a la LH-I (1.2 mg/kg de hipófisis) y las LH- II (1.8 mg/kg), LH-III (1.5 mg/kg) LH-IV (1.2 mg/kg) y LH-V (7.0 mg/kg), respectivamente. La movilidad relativa (Rf) de cada isoforma se determinó por una electroforesis en geles de poliacrilamida. La LH-I presentó un Rf de 0.16 cm; las LH-II, III y IV de 0.044 cm y la LH-V de 0.11cm. El peso molecular (PM) de las LH-I y LH-V correspondió a 37.5 kilodaltones (kDa), y de 38.5 kDa para la LH-II, LH-III y LH-IV. El análisis por inmunotransferencia identificó bandas de PM de 59.0, 37.5 y 22.0 kDa en los estándares como en las isoformas. La potencia biológica in vivo correspondió a 1.04 U/mg (LH-I); 5.9 U/mg (LH-II), 0.16 U/mg (LH-III), 0.86 U/mg (LH-IV) y 1.4 U/mg (LH-V) y la concentración de LH por radioinmunoensayo (RIA) a la dosis ED50 fue de 2.27 ng/tubo (LH-I), 1.19 ng/tubo (LH-II), 1.35 ng/tubo (LH-III), 0.66 ng/tubo (LH-IV) y 1.71 ng/tubo (LH-V). Los datos muestran la obtención de dos isoformas de elución a pH 6.8 (I y V) y tres isoformas a pH 9.5 (II, III y IV), con heterogeneidad de carga, diferente actividad biológica y concentración inmunorreactiva de LH en un sistema estándar, con rendimientos superiores para intentar el desarrollo de sistemas analíticos más precisos.


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