Miyares-Estrada M, Torres-Idavoy D, Padrón-Morales S, Valdés-Hernández J, Díaz-Martínez M, Bonilla-Hernández RM

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 16
Paginas: 33-44
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RESUMEN

Las sales de amonio se utilizan en las fermentaciones para suplementar las cantidades deficitarias de nitrógeno y estabilizar el pH del medio de cultivo. El ion amonio en exceso, ejerce un efecto perjudicial en el proceso fermentativo ya que inhibe el crecimiento microbiano. Con el objetivo de monitorear y controlar la concentración de amonio durante el proceso de fermentación, se desarrolló un método con el reactivo de Neesler, para la cuantificación de dicho analito. El ensayo se estandarizó mediante: selección del equipo de medición; tiempo de reacción del ensayo y comparación de las sales estándares de amonio. El método se caracterizó con la evaluación de los parámetros: especificidad; linealidad y rango del sistema, límite de cuantificación, exactitud y precisión. El método demostró ser específico. Se establecieron dos sistemas con curvas que fueron lineales en los rangos de cloruro de amonio (2 a 20 µg/mL) y sulfato de amonio (5 a 30 µg/mL). Los límites de cuantificación fueron los puntos inferiores de cada rango de trabajo. El método resultó ser preciso y exacto. Este ensayo se aplicó a muestras de cultivos de levadura y bacterias del género Saccharomyces y Escherichia coli respectivamente. Se desarrolló un método novedoso en microplaca para la cuantificación y control analítico del amonio. Mediante este método se controla este componente químico fundamental en las fermentaciones, para optimizar el medio de cultivo. Se logra una adecuada expresión de proteínas recombinantes y la obtención de candidatos vacunales para uso clínico.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

1. Vogel A. Química analítica cualitativa. Buenos Aires: Kapelusz; 1953.

2. Boltz DF, Howell JA. Colorimetric determination of nonmetals. 2nd ed. New York: John Wiley Edition; 1978.

3. Norma Mexicana. NMX-K 1968-231. México D.F: Secretaria de Comercio y Fomento Industrial (SECOFI); 1968.

4. Cáceres J. Evaluación analítica y optimización de procesos de oxidación avanzada en planta piloto solar. [Tesis Doctoral]. Andalucía: Universidad de Almería; 2002.

5. Estrada-Fernández P, Riolobos-Regadera MC, Gutiérrez Delgado JD. Manual de Control Analítico de la Potabilidad de las Aguas de Consumo Humano. 1a ed. Madrid: Díaz de Santos; 1983.

6. AWWA. Standard Methods for the examination of water and wastewater. 16a edition. Washington: American Public Health Association-American Water Works Association-Water Environment Federation; 1985.

7. Sigarroa A. Biometría y Diseño experimental. La Habana: Edición Pueblo y Educación; 1985.

8. Romer J. "Análisis de agua". Barcelona: Eds. Omega S.A; 1989.

9. Chaloner-Larsson G, Anderson R, Egan A. WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements. Part 2: Validation. Validation of analytical assays. Geneva: WHO; 1997.

10. Serret A, Rosales I. Validación de métodos analíticos. Segundo Taller Nacional de Validación. La Habana: Grupo Nacional de Validación (GNV); 1997.

11. International Conference on Harmonisation. ICH validation of analytical procedures: Text and Methodology. London: ICH; 2005.

12. Walfish S. Analytical Methods: A Statistical Perspective on the ICH Q2A and Q2B Guidelines for Validation of Analytical Methods. BioPharm International 2006;19(12):28-37.

13. Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos (CECMED). Validación de Métodos Analíticos. Regulación No.41. La Habana: CECMED; 2007.

14. Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos (CECMED). Buenas Prácticas de Laboratorio para el Control de Medicamentos. Anexo 1 Regulación No.37. La Habana: CECMED; 2012.

15. García J. Aplicación del análisis de riesgo a la producción de proteínas recombinantes expresadas en Escherichia coli. VacciMonitor 2012;21(2):35-42.

16. García J. Estrategias de obtención de proteínas recombinantes en Escherichia coli. VacciMonitor 2013;22(2):30-9.