Alvarado J, Álvarez Y, Pedrera L, Ros U, Lanio ME, Valle A, Álvarez C

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 26
Paginas: 53-56
Archivo PDF: 246.92 Kb.

RESUMEN

Las actinoporinas son proteínas formadoras de poro, altamente hemolíticas, de aproximadamente 20 kDa, con una elevada afinidad por las membranas que contienen esfingomielina. En el extracto crudo de la anémona marina Anthopleura nigrescens se detectó actividad hemolítica (AH). Con el fin de identificar la presencia de proteínas formadoras de poros, similares a las actinoporinas, se fraccionó y analizó este extracto crudo. Se sometió a cromatografía de filtración en gel de Sephadex G50 medio, y se obtuvieron tres picos resueltos (P-I, P-II y P-III), según su absorbancia a 280 nm. La caracterización funcional del extracto y las fracciones cromatográficas se evaluaron por la AH frente a eritrocitos humanos. El extracto crudo y los picos II y III mostraron AH. Curiosamente la AH del extracto crudo y del pico II fueron inhibidas por vesículas unilamelares pequeñas de fosfatidilcolina: esfingomielina (1:1). Tanto el extracto crudo como P-II revelaron al menos una banda proteica de alrededor de 20 kDa, en SDS-PAGE. La inhibición por esfingomielina de la AH del extracto y la localización de esta propiedad en P-II, podría asociarse con una banda proteica de alrededor de 20 kDa, lo que sugiere la presencia de al menos una actinoporina en A. nigrescens. Este es el primer informe de una actividad bioquímica para esta anémona marina. Se continúa trabajando para purificar y caracterizar las entidades moleculares responsables de esta AH inhibida por esfingomielina.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

1. Pazos IF, Álvarez C, Gómez T, Lanio M. Caracterización enzimática de una fracción con actividad fosfolipasídica aislada de la anémona marina Stichodactyla helianthus. Revista Biología. 1993;7(2):90-6.

2. Romero L, Marcussi S, Marchi-Salvador DP, Silva FP Jr, Fuly AL, Stabeli RG, et al. Enzymatic and structural characterization of a basic phospholipase A(2) from the sea anemone Condylactis gigantea. Biochimie. 2010;92(8):1063-71.

3. Moran Y, Genikhovich G, Gordon D, Wienkoop S, Zenkert C, Ozbek S, et al. Neurotoxin localization to ectodermal gland cells uncovers an alternative mechanism of venom delivery in sea anemones. Proc Biol Sci. 2012;279(1732):1351-8.

4. Diochot S, Lazdunski M. Sea anemone toxins affecting potassium channels. Prog Mol Subcell Biol. 2009;46:99-122.

5. Honma T, Shiomi K. Peptide toxins in sea anemones: structural and functional aspects. Mar Biotechnol (NY). 2006;8(1):1-10.

6. Delfin J, Gonzalez Y, Diaz J, Chavez M. Proteinase inhibitor from Stichodactyla helianthus: purification, characterization and immobilization. Arch Med Res. 1994; 25(2):199-204.

7. Bernheimer AW, Avigad LS. Properties of a toxin from the sea anemone Stoichacis helianthus, including specific binding to sphingomyelin. Proc Natl Acad Sci USA. 1976;73(2):467-71.

8. Kem WR, Dunn BM. Separation and characterization of four different amino acid sequence variants of a sea anemone (Stichodactyla helianthus) protein cytolysin. Toxicon. 1988;26(11):997-1008.

9. Lanio ME, Morera V, Alvarez C, Tejuca M, Gomez T, Pazos F, et al. Purification and characterization of two hemolysins from Stichodactyla helianthus. Toxicon. 2001; 39(2-3):187-94.

10. Bellomio A, Morante K, Barlic A, Gutierrez-Aguirre I, Viguera AR, Gonzalez- Manas JM. Purification, cloning and characterization of fragaceatoxin C, a novel actinoporin from the sea anemone Actinia fragacea. Toxicon. 2009;54(6):869-80.

11. Kohno Y, Satoh H, Iguchi A, Nagai H. Characterization of a new hemolytic protein toxin from the sea anemone Anthopleura asiatica. Fish Sci. 2009;75(4):1049-54.

12. Monastyrnaya M, Leychenko E, Isaeva M, Likhatskaya G, Zelepuga E, Kostina E, et al. Actinoporins from the sea anemones, tropical Radianthus macrodactylus and northern Oulactis orientalis: Comparative analysis of structure-function relationships. Toxicon. 2010;56(8):1299-314.

13. Anderluh G, Sepčic K, Turk T, Maček P. Cytolytic proteins from Cnidarians- an Overview. Acta Chim Slov. 2011;58(4): 724-29.

14. Belmonte G, Pederzolli C, Macek P, Menestrina G. Pore formation by the sea anemone cytolysin equinatoxin II in red blood cells and model lipid membranes. J Membr Biol. 1993;131(1):11-22.

15. Valcarcel CA, Dalla Serra M, Potrich C, Bernhart I, Tejuca M, Martinez D, et al. Effects of lipid composition on membrane permeabilization by sticholysin I and II, two cytolysins of the sea anemone Stichodactyla helianthus. Biophys J. 2001;80(6):2761-74.

16. Anderluh G, Maček P. Cytolytic peptide and protein toxins from sea anemones (Anthozoa: Actiniaria). Toxicon. 2002; 40(2):111-24.

17. Potrich C, Tomazzolli R, Dalla Serra M, Anderluh G, Malovrh P, Macek P, et al. Cytotoxic activity of a tumor protease-activated pore-forming toxin. Bioconjug Chem. 2005; 16(2):369-76.

18. Tejuca M, Anderluh G, Dalla Serra M. Sea anemone cytolysins as toxic components of immunotoxins. Toxicon. 2009;54(8):1206-14.

19. Alvarez C, Mancheño JM, Martinez D, Tejuca M, Pazos F, Lanio ME. Sticholysins, two pore-forming toxins produced by the Caribbean Sea anemone Stichodactyla helianthus: their interaction with membranes. Toxicon. 2009;54(8):1135-47.

20. Alegre-Cebollada J, Onaderra M, Gavilanes JG, del Pozo AM. Sea anemone actinoporins: the transition from a folded soluble state to a functionally active membrane-bound oligomeric pore. Curr Protein Pept Sci. 2007;8(6): 558-72.

21. Acuña FH, Alvarado J, Garase A, Cortés J. First record of the sea anemone Anthopleura nigrescens (Cnidaria: Actiniaria: Actiniidae) on the Pacific coast of Central America. Mar Biodiv Rec. 2012;24(5):1-3.

22. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976;72:248-54.

23. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.

24. Martinez D, Campos AM, Pazos F, Alvarez C, Lanio ME, Casallanovo F, et al. Properties of St I and St II, two isotoxins isolated from Stichodactyla helianthus: a comparison. Toxicon. 2001;39(10):1547-60.

25. Pazos IF, Alvarez C, Lanio ME, Martinez D, Morera V, Lissi EA, et al. Modification of sticholysin II hemolytic activity by free radicals. Toxicon. 1998;36(10):1383-93.

26. Rouser G, Fkeischer S, Yamamoto A. Two dimensional then layer chromatographic separation of polar lipids and determination of phospholipids by phosphorus analysis of spots. Lipids. 1970;5(5):494-6.