2013, Número 3
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VacciMonitor 2013; 22 (3)
SDS-PAGE y análisis densitométrico para determinar la concentración de lipopolisacáridos de Neisseria meningitidis serogrupos A, W135 y X
Cuello M, Cabrera O, Rodríguez Y, Thurheim G, Norheim G, Cabrera RA, Álvarez M, Álvarez M, Blain K, Naess L, Rosenqvist E, García L
Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 19
Paginas: 36-42
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RESUMEN
Desde hace varios años el Instituto Finlay, en colaboración con el Instituto Noruego para la Salud Pública,
trabajan en un proyecto para la obtención de candidatos vacunales a partir de vesículas de membrana externa
(VME) de
Neisseria meningitidis serogrupos A, W135 y X. Por ello es necesario establecer las especificaciones de
calidad para el lipopolisacárido (LPS), principal causante de la pirogenicidad de estas vacunas. El objetivo de
este reporte fue establecer las condiciones del SDS-PAGE como método de control de la calidad de las VME como
ingrediente farmacéutico activo (IFA), provenientes de
N. meningitidis serogrupos A, W
135 y X. Se determinaron los
inmunotipos y las concentraciones de LPS contaminantes, para lo cual se utilizaron geles de SDS-PAGE al 15%
y muestras de LPS de los diferentes serogrupos de
N. meningitidis. Se realizó el revelado de los geles con tinción
con plata específica para LPS y los resultados se analizaron en un densitómetro GS-800 (Bio-Rad , controlado por
el programa "Quantity One". Se obtuvieron curvas patrones para cada LPS que determinaron la concentración de
LPS en estas muestras y se comprobó la utilidad del método al cuantificar la concentración de LPS en muestras
de IFAs de VME de los diferentes serogrupos de
N. meningitidis. Así se estableció la metodología para determinar
la concentración de LPS de
N. meningitidis serogrupos A, X y W
135 en muestras de IFA de VME con el SDS-PAGE
y se confirmaron las especificaciones de calidad establecidas para este parámetro.
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