Hernández-Escamilla R, Espinosa-Lara JM, Quintana-Hau JD, Uribe-Luna S,

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 27
Paginas: 58-64
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RESUMEN

El objetivo de este trabajo fue investigar si la capacidad de la DNA polimerasa I de reparar el daño letal causado por la luz ultravioleta en Escherichia coli puede ser sustituida por la DNA polimerasa beta de rata. El origen de replicación oriC del plásmido pβ5 fue reemplazado por el origen de replicación rep de pSC101 y denominado pβ6. La presencia del gene pol β en el nuevo plásmido, se verificó por PCR. Con este plásmido (pβ6) se transformó a una cepa de Escherichia coli polA-1 (WP6). Por medio de PAGE-SDS, se demostró que los extractos libres de células de las cepas portadoras del plásmido pβ5 producían una proteína de peso similar al de la DNA polimerasa beta de rata (40 kDa), y en la cepa portadora de pβ6 una proteína de peso molecular ligeramente inferior en lugar de la proteína original. El análisis “western”, con anticuerpos policlonales, reveló que las cepas con pβ5 producían la DNA polimerasa beta. No obstante, no se detectó la enzima en el extracto de la cepa con pβ6. Las cepas con pβ5 mostraron un cambio moderado en la resistencia a la luz ultravioleta respecto a las cepas control. En cambio, la cepa polA-1 con pβ6 recuperó, a dosis de 60-90 J/m², más de cuatro logaritmos de viabilidad comparado con la cepa polA-1, alcanzando aproximadamente los mismos niveles de resistencia que las cepas portadoras de la DNA polimerasa I. Los resultados sugieren que la DNA polimerasa de rata, aunque probablemente se degrada rápidamente en los extractos de la cepa recombinante WP6/pβ6, es capaz de reparar en Escherichia coli el daño letal causado por la luz ultravioleta.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

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