Camacho F, Puchades Y, Aguilar A, Amín N, García A, Otero O, Santiago VN

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 12
Paginas: 6-9
Archivo PDF: 101.50 Kb.

RESUMEN

La cromatografía de exclusión molecular puede ser usada para purificar fagos filamentosos, el virus bacteriano más usado en la tecnología de presentación de péptidos y proteínas en la superficie de los fagos. El bacteriófago, luego de ser precipitado del sobrenadante de cultivo con polietilenglicol, fue aplicado a una columna de Sepharose CL-4B de 100 cm de altura, usando como fase móvil solución tampón fosfato (PBS). Se obtuvo un 61,3% de recobrado del fago total aplicado y, mediante el análisis por SDS-PAGE, se verificó la pureza de estas preparaciones. La cromatografía de exclusión molecular es una metodología atractiva para la obtención de preparaciones de bacteriófagos con alta pureza.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

1. Fagerlund A, Myrset AH, Kulseth MA. Construction and characterization of a 9-mer phage display pVIII-library with regulated peptide density. Appl Microbiol Biotechnol 2008;80:925–36.

2. Santiago N, Puchades Y. Bacteriófagos: de la terapia con fagos a la biología combinatoria. Biotecnología Aplicada 2001;18(3):135-47.

3. Uchiyama F, Tanaka Y, Minari Y, Tokui N. Designing scaffolds of peptides for phage display libraries. J Biosci Bioeng 2005;99:448-56.

4. Perea SE, Reyes O, Puchades Y, Mendoza O, Vispo NS, Torrens I, et al. Antitumor Effect of a Novel Proapoptotic Peptide thatImpairs the Phosphorylation by the Protein Kinase 2 (Casein Kinase 2). Cancer Research 2004;64:7127-9.

5. Folgori A, Tafi R, Meola A, Felici F, Galfre G, Cortese R, et al. A general strategy to identify mimotopes of pathological antigens using only random peptide libraries and human sera. EMBO J 1994;13:2236-43.

6. Kehoe JW, Kay BK. Filamentous phage display in the new millennium. Chem Rev 2005;105:4056–72.

7. Kay BK, Winter J, MacCafferty J. Phage display of peptides and proteins. A laboratory manual. San Diego: Academic Press Inc; 1996.

8. Yamamoto RK, Alberts BM, Bezinger R, Lawhorne L, Treiber G. Rapid bacteriophage sedimentation in the presence of polyethilene glycol and its application to large scale virus purification. Virology 1970;40:734-44.

9. Smith GP, Gingrich TR. Hydroxyapatite chromatography of phage-display virions. Biotechnique 2005;39:879-83.

10. Zakharova MY, Kozyr AV, Ignatova AN, Vinnikov IA, Shemyakin IG, Kolesnikov AV. Purification of filamentous bacteriophage for phage display using size-exclusion chromatography. BioTechniques 2005;38:194-98.

11. Scott JK, Smith GP. Searching for peptide ligands with an epitope library. Science 1990;249:386-90.

12. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970;227:680-5.