Pérez-López L, Hernández-Pérez L, Melchor-Rodríguez A, Zulueta-Rodríguez O, López-Cisnero R

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 34
Paginas: 137-146
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RESUMEN

En este trabajo se describe un procedimiento de purificación de TSH humana (hTSH) a partir de glándulas hipofisiarias mediante cromatografía de inmunoafinidad, empleando un anticuerpo policlonal específico contra la cadena beta de la hormona. Las glándulas se secaron con acetona y se pulverizaron empleando un molino. La extracción de TSH se realizó con la mezcla acetato de amonio:etanol. El extracto resultante se precipitó con etanol al 87% (v/v). El precipitado obtenido se resuspendió con éter dietílico y se dejó secar por evaporación. El polvo fue resuspendido en solución salina-fosfato pH 7.4, clarificado y aplicado a una columna empaquetada con Sepharose-IgG de carnero anti ΒTSH. La elución de la hormona se realizó con glicina 0.2 mol/L pH 2.8. La TSH obtenida se liofilizó y se conservó a -20 °C. La pureza se evaluó mediante PAGE-SDS tomando como referencia TSH comercial. La TSH purificada mostró una masa molecular de 54.1 kDa y una pureza de 93.87%. La caracterización de las subunidades se realizó mediante PAGE-SDS desnaturalizante, obteniéndose dos bandas correspondientes a las subunidades α y Β, con masas moleculares de 16.8 kDa y 20.2 kDa, respectivamente. El rendimiento y el grado de purificación fueron 43.7 y 41.7%, respectivamente. La actividad específica de la TSH purificada fue de 21.1 UI/mg. El procedimiento de purificación diseñado es sencillo, reproducible y permite obtener la hormona con características fisicoquímicas y biológicas similares a la hormona comercial, indicada para su uso como inmunógeno o estándar de calibración.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

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