1999, Número 4
Desarrollo de un método de radioinmunoanálisis para cortisol, utilizando anticuerpos obtenidos y purificados de la yema de huevo de gallinas inmunizadas
Rangel PLE, Perera MG, Lassala IA, Zarco QLA
Idioma: Español/Inglés
Referencias bibliográficas: 27
Paginas: 289-295
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RESUMEN
Se indujeron anticuerpos anticortisol en gallinas de postura, para lo cual se realizó una primer aplicación de 1 mg de cortisol conjugado con albúmina sérica bovina (BSA) y mezclado con adyuvante completo de Freund y solución salina fisiológica; posteriormente se realizaron seis aplicaciones más de 0.5 mg del mismo inmunógeno, los cuales se aplicaron a intervalos de 15 días. Se encontró en suero un título promedio, durante el periodo de colección del huevo, de 39.4% en una dilución de trabajo 1:1000. Los anticuerpos anticortisol se recuperaron y purificaron a partir de la yema de huevo y con ellos se desarrolló la prueba de radioinmunoanálisis (RIA) de fase líquida. Los anticuerpos de la yema mostraron alta especificidad para el cortisol respecto de otros esteroides (reacción cruzada menor a 0.1% con androstenediona, estradiol, 17-hidroxiprogesterona y testosterona), así como una sensibilidad de 339 pg/ml. La precisión del RIA fue adecuada (C.V. interensayo menor a 15%), al igual que la recuperación del sistema. El rendimiento fue de 594 552.63 mg de proteína, que sirven para procesar 95 000 000 tubos. Se concluye que la yema de huevo de gallinas inmunizadas es una efectiva fuente de anticuerpos anticortisol, la cual puede ser utilizada como una alternativa al suero de conejos.
REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)
Zarrow MX, Yochim JM, McCarthy JL. Experimental endocrinology. A sourcebook of basic techniques. New York: Academic Press, 1964.
Abraham G, Garza R. Radioimmunoassay of steroids. In: Abraham GE, editor. Handbook of radioimmunoassay. New York: Morton K. Schwartz, 1977.
Patterson R, Youngner JL, Weigle WO, Dixon FJ. Antibody production and transfer to egg yolk in chickens. J Immunol 1962;89:272-278.
Bauwens R, Devos M, Kint J, De Leenher A. Chicken egg yolk and rabbit serum compared as sources of antibody for radioimmunoassay of 1,25-dihydroxyvitamin D in serum plasma. Clin Chem 1988;34:2153-2154.
Gassmann M, Thömmes P, Weiser T, Hübscher U. Efficient production of chicken egg yolk antibodies against a conserved mammalian protein. FASEB 1990;4:2528-2532.
Otani H, Matsumoto K, Saeki A, Hosono A. Comparative studies on properties of hen egg yolk IgY and rabbit serum IgG antibodies. Lebensm Wiss Technol 1991;24:152-158.
Schade R, Pfister C, Halatsch R, Henklein P. Policlonal IgY antibodies from chicken egg yolk: an alternative to the production of mammalian IgG type antibodies in rabbits. ATLA 1991;19:403-419.
Svendsen L, Crowley A, Ostergaard H, Stodulski G, Hau J. Development and comparison of purification strategies for chicken antibodies from egg yolk. Lab Anim Sci 1995;45:89-93.
Svendsen L, Crowley A, Stodulski G, Hau J. Antibody production in rabbits and chickens immunized with human IgG. A comparison of titre and avidity development in rabbit serum, chicken serum and egg yolk using three different adyuvants. J Immunol Methods 1996;191:113-120.
Larsson A, Sjöquist J. Chicken antibodies: a tool to avoid false positive results by rheumatoid factor in the latex fixation tests. J Immunol Methods 1988;108:205-210.
Benson HN, Brumfield HP, Pomeroy BS. Requirement of avian C1 for fixation of Guinea pig complement by avian antibody-antigen complex. J Immunol 1961;87:63-68.
Montes P, Murcia M, Zarco Q. Producción de anticuerpos antiprogesterona a partir de yema de huevo de gallinas y del suero sanguíneo de conejos, para ser utilizados en radioinmunoanálisis. Vet Méx 1994;25:117-125.
Ermeling B, Steffen E, Fish R, Hook R. Evaluation of subcutaneous chambers as alternative to conventional methods of antibody production in chickens. Lab Anim Sci 1992;42:402-407.
IAEA. Laboratory training manual on radioimmunoassay in animal reproduction. Technical reports series No. 233. Vienna, Austria: FAO, International Atomic Energy Agency, 1984.
Patterson R, Youngner JL, Weigle WO, Dixon FJ. The metabolism of serum proteins in the hen and chick and secretion of serum proteins by the ovary of the hen. J Gen Physiol 1962b;45:501-513.
Garvey S, Cremer E, Sussdort H. Methods in immunology 3rd ed. London: WA Benjaminton, 1979.
Nicoll SC, Licht P. Evolutionary biology of prolactin and somatotropins. II. Electrophoretic comparison of tetrapod somatotropins. Gen Comp Endocrinol 1971;17:490-507.
Munro C, Stabenfeldt G. Development of a microtitre plate enzyme immunoassay for the determination of progesterone. J Endocrinol 1984;101:41-49.
Bedolla TN, Ulloa-Aguirre A, Landeros VJ, Pérez- Palacios G. Análisis de datos y control de calidad en el radioinmunoanálisis. I. Guía para la evaluación de resultados. Rev Invest Clin 1984;36:179-192.
Amyx HL. Control of animal pain and distress in antibody production and infectious disease studies. J Am Vet Assoc 1987;191:1287-1293.
Broderson JR. A retrospective review of lessons associated with the use of Freund’s adyuvant. Lab Anim Sci 1989;39:400-405.
Rangel PL. Comparación de dos fuentes biológicas para producir anticuerpos destinados al desarrollo de métodos de radioinmunoanálisis para determinar los niveles plasmáticos de testosterona y cortisol (tesis de maestría). México (DF) México: Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. UNAM, 1998.
Tizard I. Inmunología veterinaria. 3ª ed. México (DF): Interamericana, 1989.
Zar JH. Bioestatistical analysis. 3rd ed. Newark (NJ): Prentice Hall, New Jersey, 1996.
Russell WMS, Burch RL. The principles of humane experimental technique. South Mimms (UK): London Methuen & Co. Ltd., 1992.
Hsu WH, Crump MH. Glándula adrenal. En: McDonald L, editor. Endocrinología veterinaria y reproducción. 4ª ed. México (DF): Interamericana, 1989.
Libertun C. Radioinmunoanálisis. Fundamentos y aplicaciones. Buenos Aires, Argentina: López Libreros Editores,1980.