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2024, Número 1

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Rev Hematol Mex 2024; 25 (1)


Identificación de la inversión del intrón 22 por medio de IS-PCR en dos familias con hemofilia A y B

Mendoza SI, Olarte CI, Rivera DTS, Cerón MR, De la Cruz RA, Collazo JJ, Martínez MC, Martínez TA

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 24
Paginas: 11-17
Archivo PDF: 492.19 Kb.


RESUMEN

Antecedentes: Las hemofilias son genopatías recesivas ligadas al cromosoma X que sobrevienen por deficiencia en la producción de los factores de coagulación. El objetivo de este estudio fue determinar la inversión del intrón 22 del factor 8 de la coagulación en dos familias con hemofilia A y B y su repercusión clínica.
Materiales y Métodos: Estudio observacional, descriptivo, que evaluó la alteración molecular en la inversión del intrón 22 en el gen que codifica para el factor VIII de la coagulación en tres familias con hemofilia A y B. Como control negativo se utilizaron individuos sanos. Se tomó muestra de sangre periférica de cada miembro de la familia y del paciente, se aislaron los leucocitos de los que se extrajo ADN. Se realizó por medio de la reacción en cadena de la polimerasa con desplazamiento inverso (IS-PCR) mediante restricción con la enzima BclII, los fragmentos digeridos fueron ligados con T4 ligasa y finalmente se realizó PCR inversa con primers específicos para los tipos 1 y 2 de la inversión del intrón 22.
Resultados: En la familia 1, el paciente tuvo inversión del intrón 22 tipo 2, la madre fue positiva y portadora de ésta, una hija del paciente fue negativa a la inversión del intrón 22 y la otra positiva con tipo 2. En la familia 2 el paciente tuvo inversión del intrón 22 tipo 2, la hermana, madre y abuela del paciente eran portadoras de ésta y dos tías y una prima fueron negativas. En la familia 3, el paciente tenía hemofilia B moderada, dos hermanas y la madre fueron negativas para inversión del intrón 22. Los individuos sanos fueron negativos.
Conclusiones: La inversión del intrón 22 tipo 2 fue la más frecuente en los pacientes con hemofilia A severa. La técnica de IS-PCR para el estudio de la inversión del intrón 22 constituye una herramienta útil y confiable en el análisis de pacientes y familias afectadas con hemofilia A severa porque permite caracterizar en una sola muestra de sangre el tipo de inversión del intrón 22 (tipo 1 o 2) del paciente.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. Pandey GS, Mittal B. Molecular diagnosis in hemophilia A.J Postgrad Med 2001; 47 (4): 273-274.

  2. Lakich D, Kazazian H, Antonarakis SE, Gitschier J. Inversionsdisrupting the factor VIII gene are a common cause ofsevere haemophilia A. Nature Genet 1993; 5 (3): 236-241.doi: 10.1038/ng1193-236

  3. Naylor J, Brinke A, Hassock S, Green P, Giannelli F. CharacteristicmRNA abnormality found in half the patientswith severe haemophilia A is due to large DNA inversions.Hum Mol Genet 1993; 2 (11): 1773-1778. doi: 10.1093/hmg/2.11.1773

  4. Walsh PN, Rainsford SG, Biggs R. Platelet coagulant activitiesand clinical severity in haemophilia. Thromb DiathHaemorrh 1973; 29 (3): 722-729. DOI: 10.1055/s-0038-1648115

  5. Bauer KA, Mannucci PM, Gringeri A, et al. Factor IXa-factorVIIIa-cell surface complex does not contribute to the basalactivation of the coagulation mechanism in vivo. Blood1992; 79 (8): 2039-2047.

  6. Rossetti LC, Raic CP, Larripa IB, De Brasi CD. Genotypingthe hemophilia inversion hot spot by using Inverse PCR.Clin Chem 2005; 51 (7): 1154-1158. doi: 10.1373/clinchem.2004.046490

  7. Rafeeq A, Kannan M, Choudhary VP, Renu S. Mutationreport: intron 1 & 22 inversion in Indian hemophilics. AnnHematol 2003; 82 (9): 546-547. doi: 10.1007/s00277-003-0704-3

  8. Soares RPS, Chamone DAF, Bydlowski SP. FVIII geneinversion and polymorphism in Brazilian patients withhemophilia A: carrier detection and prenatal diagnosis.Hemophilia 2001; 7 (3): 299-305. doi: 10.1046/j.1365-2516.2001.00508.x

  9. Akkarapatumwong V, Oranwiroon S, Pung-amritt P. Mutationof FVIII gene in Thai haemophilia A patients. HumMutat 2000; 15 (1): 117-118. doi: 10.1002/(SICI)1098-

  10. 1004(200001)15:1<117::AID-HUMU27>3.0.CO;2-E10. Naylor JA, Buck D, Green PM, Williamson H, et al. Investigationof the factor VIII intron 22 repeated región (int22h) andthe associated inversion junctions. Hum Mol Genet 1995;4 (7): 1217-1224. doi: 10.1093/hmg/4.7.121

  11. Guo Z, Yang L, Qin X, Liu X, Zhang Y. Spectrum of moleculardefects in 216 Chinese families with hemophilia A: Identificationof noninversion mutation hot spots and 42 novelmutations. Clin Appl Thromb Hemost. 2018; 24 (1): 70-78.doi: 10.1177/1076029616687848

  12. Antonarakis SE, Rossiter JP, Young M, et al. Factor VIII geneinversions in severe hemophilia A: results of an internationalconsortium study. Blood 1995; 86 (6): 2206-22113

  13. Liu Q, Sommer SS. Subcycling-PCR for multiplex longdistanceamplification of regions with high and low GCcontent: application to the inversion hotspot in the factorVIII gene. Biotechniques 1998; 25 (6): 1022-1028. doi:10.2144/98256rr01

  14. Leiria LB, Roisenberg I, Salzano FM, Bandinelli E. Introns 1and 22 inversions and factor VIII inhibitors in patients withsevere haemophilia A in southern Brazil. Haemophilia 2009;

  15. 15 (1): 309-13. doi: 10.1111/j.1365-2516.2008.01868.x15. Gouw SC, van den Berg HM. The multifactorial etiologyof inhibitor development in hemophilia: Genetics andenvironment. Semin Thromb Hemost 2009; 35 (8): 723.doi: 10.1055/s-0029-1245105

  16. Graw J, Brackmann HH, Oldenburg J, Schneppenheim R,et al. Haemophilia A: from mutation analysis to new therapies.Nat Rev Genet 2005; 6 (6): 488-501. doi: 10.1038/nrg1617

  17. Ananyeva NM, Lee TK, Jain N, Shima M, Saenko EL. Inhibitorsin hemophilia A: advances in elucidation of inhibitorymechanisms and in inhibitor management with bypassingagents. Semin Thromb Hemost 2009; 35 (8): 735-51. doi:10.1055/s-0029-12451018

  18. Hemophilia A Mutation, Search, Test and Resource Site(HAMSTeRS) database (http://europium.csc.mrc.ac.uk

  19. World Federation of Hemophilia Report on the AnnualGlobal Survey 2010. Report on the Annual Global Survey

  20. 2010 is published by the World Federation of Hemophilia.www.wfh.org20. Kershaw G, Jayakodi D, Dunkley S. Laboratory identificationof factor inhibitors: the perspective of a large tertiaryhemophilia center. Semin Thromb Hemost 2009; 35 (8):760-8. doi: 10.1055/s-0029-1245108

  21. Bogdanova N, Markoff A, Pollmann H, Nowak-Göttl U, et al.Prevalence of small rearrangements in the factor VIII geneF8C among patients with severe hemophilia A. Hum Mutat2002; 20 (3): 236-7. doi: 10.1002/humu.90622

  22. Margaglione M, Castaman G, Morfini M, Rocino A, et al;AICE-Genetics Study Group. The Italian AICE-Geneticshemophilia A database: results and correlation with clinicalphenotype. Haematologica 2008; 93 (5): 722-8. doi:10.3324/haematol.124223

  23. Brower C, Thompson AR. Hemophilia A. In: Pagon RA, BirdTC, Dolan CR, Stephens K, editors. GeneReviews. Seattle(WA): University of Washington, Seattle; 1993-20024.

  24. Reitter S, Sturn R, Horvath B, Freitag R, et al; The AustrianMolecular Haemophilia Study Group. Spectrum of causativemutations in patients with haemophilia A in Austria. ThrombHaemost 2010; 104 (1): 78-85. doi: 10.1160/TH09-11-0795.




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