Aragón H, Quintana M, Ferro W, Llamo A, Menéndez G, González M, García C, García J, Somoza M, Barrisonte Y, La O T, Carpio Y, Estrada MP, Valdés R

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 34
Paginas: 2211-2216
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RESUMEN

La proteína de la nucleocápsida (proteína N) del SARS-CoV-2 es altamente inmunogénica, se expresa abundantemente durante la infección, y puede usarse con fines vacunales, para el desarrollo de ensayos serológicos, y otros. Para tales fines, la misma se ha producido en células de suspensión o de anclaje. En este estudio, la proteína N del SARS-CoV-2 fusionada al dominio extracelular de la proteína CD154 humana (N-hCD154) se produjo en células HEK-293 cultivadas en el bioreactor analítico EscoVacciXcell CelCradle™ operado en modo continuo durante 35 días. Como resultados, la cantidad de células HEK-293 cuantificadas por BioNOC™II fue de 0,88 ± 0,27 × 106, la cantidad total de células HEK-293 osciló en el rango 547,9-898,2 × 106 células/día, su viabilidad entre 89,4-98,2 %, la secreción específica de 0,6 ± 0,01 pg/célula/día y la concentración de la proteína de fusión N-hCD154 por cosecha fue de 22,38 ± 2,6 μg/mL. La pureza promedio de la proteína N-hCD154 fue del 75 %, estimada en muestras de sobrenadante de cultivo. La aplicación del método de purificación con sulfato de amonio seguido de un paso de diafiltración, permitió incrementarla a más del 95 %. En resumen, la combinación del bioreactor analítico CelCradle™ empleado en el cultivo de las células HEK-293 operado en modo continuo con la precipitación con sulfato de amonio, seguido de un paso de diafiltración, permite obtener la proteína fusionada N-hCD154 con un recobrado medio y un nivel de pureza muy alto como para ser caracterizada en futuras investigaciones con fines medicinales.

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