Montoya N, González N, Sánchez I, Pimentel R, Basabe L, Basulto RM, Galdós L, Mora N, Salazar E, Salinas D, Pérez C, Moreira A, Segura R

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 0
Paginas: 4211-4216
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RESUMEN

La proteína MY32/Ls recombinante se emplea como antígeno vacunal contra el piojo de mar Lepeophtherius salmonis. La misma se produce a partir de la fermentación del sistema de expresión en la cepa bacteriana de Escherichia coli BL21(DE3)-pET28a-my32/Ls, la cual se preserva congelada a –70 ºC en un Banco de Células Primario (BCP) puro y homogéneo. El objetivo del presente trabajo fue determinar la estabilidad genética del BCP mediante en células crecidas propagadas durante un alto número de generaciones, así como evaluar su influencia sobre el crecimiento y la expresión de la proteína. Al cultivo con elevado número de generaciones se le analizó la estabilidad plasmídica, la expresión de la proteína recombinante, y el patrón de restricción enzimática y se secuenció el gen de interés. Se determinó que las la cepa se propaga durante 46 generaciones durante el proceso productivo en un fermentador de 200-L. Se comprobó que el número de generaciones no afectó la velocidad de crecimiento (µ) ni el tiempo de duplicación durante todo el estudio. La estabilidad plasmídica y la expresión de la proteína recombinante se mantuvieron a niveles equivalentes entre el BCP y la cepa propagada durante casi 100 generaciones, y se obtuvo una coincidencia del 100 % de la identidad plasmídica del gen my32/Ls entre ambos cultivos. El patrón de restricción obtenido coincidió con el esperado para el plásmido recombinante. El estudio permitió conocer que el sistema de expresión de la proteína MY32 es genéticamente estable durante todo el proceso productivo, lo que posibilita la elaboración de un Banco de Células de Trabajo que garantice la estabilidad, la integridad y la seguridad de las producciones a gran escala de la proteína MY32/Ls.