Ramos Y, Besada V, González LJ, García Y, Cruz Y, Gutierrez E, Machado Y, Leyva A, Gonzáles A, Sánchez A, Pérez-Riverol Y, Rodríguez-Ulloa A, García D, Castellanos-Serra L

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 16
Paginas: 4511-4513
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RESUMEN

Para aumentar las posibilidades de detección de proteínas de baja abundancia en mezclas complejas mediante técnicas de proteómica, es esencial utilizar métodos de separación de proteínas o péptidos para reducir la complejidad de la muestra biológica. Sin embargo, a pesar del amplio uso de varias técnicas electroforéticas, no se había investigado con anterioridad la utilidad de la electroforesis de zona para el fraccionamiento de mezclas complejas de péptidos. En el presente trabajo se estableció un nuevo método para estudios de proteómica, denominado Doble Fraccionamiento por PAGE (DF-PAGE). Este combina el fraccionamiento de proteínas por SDS-PAGE, la hidrólisis enzimática en el gel y la separación de péptidos por PAGE sin SDS, esta última aplicada por primera vez para el fraccionamiento y la simplificación de mezclas complejas de péptidos. Además, fue necesario diseñar para el DF-PAGE un nuevo sistema discontinuo de soluciones tampón para la selección de péptidos ácidos (pI ≤ 5.5). El DF-PAGE permitió identificar un mayor número de proteínas que la PAGE-SDS y la focalización isoeléctrica en solución. Su aplicación a la caracterización del principio activo de la vacuna VA-MENGOC-BC permitió identificar 67 proteínas previamente no detectadas con las técnicas tradicionales. También se identificaron mediante el DF-PAGE una serie de proteínas moduladas diferencialmente por el péptido antitumoral CIGB-552 en la línea celular HT-29 de adenocarcinoma de colon, lo cual contribuyó a la caracterización de las bases moleculares de la acción de dicho péptido. Este trabajo mereció el Premio Anual de la Academia de Ciencias de Cuba para el año 2015.

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