García BL, Rodríguez FB, Aja MG, Pérez CJA, Russeaux GN, Valdés DL, Licea TMV

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 6
Paginas: 396-404
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RESUMEN

Introducción: la determinación de urea en suero reviste gran importancia para el diagnóstico clínico de diversas afecciones de origen renal. Los métodos más aplicados para este fin implican el uso de la enzima ureasa por su alta especificidad en la hidrólisis de este analito, entre los cuales el método de Berthelot, emplea la ureasa en el primer paso de la reacción, seguido de una reacción colorimétrica del amoníaco liberado. La presentación de la ureasa en forma líquida es uno de los elementos que hacen más sencillo este proceso, de fácil y rápida ejecución con resultados confiables.
Objetivo: desarrollar una solución de ureasa estable, como componente del juego de diagnosticador de urea en suero.
Métodos: se diseñó y optimizó la formulación teniendo en cuenta: la concentración de la enzima, las soluciones buffer, los preservos y los compuestos orgánicos polihidroxilados para lograr un producto en forma líquida estable. Se evaluó la especificidad, precisión, linealidad, exactitud (comparación de métodos) y la sensibilidad del método; así como la estabilidad en vida de estante de 2 a 8 °C, por un período de 18 meses.
Resultados: se logró un reactivo líquido estable (› 12 meses de 2 a 8 °C), donde el método analítico resultó ser específico y lineal hasta 30 mmol/L de urea (r²= 0,999), sensible, preciso coeficiente de variación, CV ‹ 3 %) y exacto (r ≥ 0,999), satisfactorio para el uso al que se destina el producto, con calidad analítica comparable con los existentes en el mercado.
Conclusiones: el desarrollo de la formulación de ureasa líquida estable, permitirá introducir este componente esencial, en el juego de reactivos de urea que oferta la Industria Nacional al Sistema de Salud de acuerdo con los requisitos vigentes (Reg. 8-2001) para su comercialización.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

1. Berg Jeremy M, Tymoczko John L, Stryer L. Biochemistry. 6th ed. London: W.H. Freeman and Company; 2011. p. 205-38.

2. Copeland A, Allen R. Evaluation of enzyme inhibitors in drug discovery a guide for medicinal chemists and pharmacologists. Vol 46. Hoboken, New Jersey: John Wiley & Sons; 2007.

3. Pazhang MKK, Ranjbar B, Hosseinkhani S. Effects of water-miscible solvents and polyhydroxy compounds on the structure and enzymatic activity of thermolysin. Rev J Biotechnol. 2006;127(1):45-53.

4. Catálogo de Productos de Sistemas Diagnósticos Diasys 2012. Holzheim, Alemania: Grafikdesign; 2012.

5. Regulación D 08-13. Reglamento para la autorización de comercialización de los diagnosticadores. La Habana: CECMED; 2013.

6. Panteghini MBR, Van Solinge WW. Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics. 4th ed. Philadelphia: Elsevier Saunders; 2006.