medigraphic.com
ISSN 1027-2852 (Digital)
ISSN 0864-4551 (Impreso)

2011, Número 1

<< Anterior

Biotecnol Apl 2011; 28 (1)


Comparación de tres métodos de extracción de ADN de tejidos embebidos en parafina

de Armas Y, Capó V, López LX, Mederos L, Díaz R

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 21
Paginas: 44-47
Archivo PDF: 281.52 Kb.


RESUMEN

La extracción de ADN de tejidos embebidos en parafina (TEP) es crucial en muchos estudios moleculares. Varios han sido los protocolos utilizados para conseguir tal propósito. En esta investigación se compararon tres métodos de extracción de ADN con la finalidad de seleccionar uno para el trabajo en nuestro laboratorio. Se tomaron diez ganglios linfáticos de diez fallecidos por sida, para su estudio histológico y bacteriológico. El ADN se extrajo por calentamiento a 100 °C (método A); con el empleo de resina quelante Chelex-100 (método B) y por digestión con proteinasa K (método C). Para la identificación de Mycobacterium tuberculosis se amplificó una región de la secuencia específica de inserción IS 6110, mediante la reacción en cadena de la polimerasa. El ADN de los TEP se obtuvo degradado, con diferencias significativas de pureza. Solo se logró amplificación con los métodos B y C; este último fue el más laborioso. El método que requirió resina quelante Chelex-100 (método B) fue el más útil: se obtuvo ADN con calidad y cantidad suficiente en un menor tiempo. Por tanto, este método puede ser considerado como una buena opción en patología molecular.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. García P, Benavente F, Melo A, Roa I, Roa JC. Efecto de la fijación en la calidad del ADN: estudio controlado con cinco fijadores. Rev Esp Patol. 2006;39:175-9.

  2. Srinivasan M, Sedmak D, Jewell S. Effect of fixatives and tissue processing on the content and integrity nucleic acids. Am J Pathol. 2002;161:1961-71.

  3. Jackson DP, Lewis FA, Taylor GR, Boylston AW, Quirke P. Tissue extraction of DNA and RNA and analysis by the polymerase chain reaction. J Clin Pathol. 1990;43:499-504.

  4. Wright DK, Manos MM. Sample preparation from paraffin-embedded tissues. En: Innis MA, editor. PCR protocols: a guide to methods and applications. San Diego: Academic Press; 1990. p. 153-6.

  5. Lench N, Stainer P, Williamson R. Simple non-invasive method to obtain DNA for gene analysis. Lancet. 1988; 1(8599):1356-8.

  6. de Armas Y, Capó V, González E, Mederos LM, Díaz R. Extracción de ADN de tejidos embebidos en parafina por Chelex-100. Rev Esp Patol. 2006;39:171-4.

  7. Heller MJ, Robinson RA, Burgart U, TenEyck CJ, Wilke WW. DNA extraction by sonication: a comparison of fresh, frozen, and paraffin-embedded tissues extracted for use in polymerase chain reaction assays. Mod Pathol. 1992;5:203-6.

  8. Hellmann A, Rohleder U, Schmitter H, Wittig M. STR typing of human telogen hairs- a new approach. Int J Legal Med. 2001;114:269-73.

  9. Van der Zanden AG, Hoentjen AH, Heilmann FG, Weltevreden EF, Schouls LM, van Embden JD. Simultaneous detection and strain differentiation of Mycobacterium tuberculosis complex in paraffin wax embedded tissues and in stained microscopic preparations. Mol Pathol. 1998;51:209-14.

  10. Ghossein RA, Ross DG, Salomon RN, Rabson AR. A search for mycobacterial DNA in sarcoidosis using the polymerase chain reaction. Am J Clin Pathol. 1994; 101:733-7.

  11. van Embden JDA, Cave MD, Crawford JT, Dale JW, Eisenach KD, Gicquel B, et al. Strain identification of Mycobacterium tuberculosis by DNA fingerprinting: recommendations for a standardized methodology. J Clin Microbiol. 1993;31:406-9.

  12. Schewe C, Goldmann T, Grosser M, Zink A, Schlüns K, Pahl S, et al. Inter-laboratory validation of PCR-based detection of Mycobacterium tuberculosis in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. Virchows Arch. 2005;447:573-85.

  13. De Armas Y, Rodríguez MM, Bisset JA, Fraga J. Modificación de un método de extracción de ADN genómico de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). Rev Colomb Entomol. 2005;31:203-6.

  14. Singer-Sam J, Tanguay RL, Riggs AD. Use of chelex to improve the PCR signal from small number of cells. Amplifications. 1989;3:11.

  15. Bonin S, Petrera F, Rosai J, Stanta G. DNA and RNA obtained from Bouin’s fixed tissues. J Clin Pathol. 2005;58:313-6.

  16. Stein A, Raoult. A simple method for amplification of DNA from paraffin-embedded tissues. Nucleic Acids Res. 1992;20:5237-8.

  17. Popper HH, Klemen H, Hoefler G, Winter E. Presence of mycobacterial DNA in sarcoidosis. Human Pathol. 1997;28:796-800.

  18. Romero RL, Juston AC, Ballantyne J, Henry BE. The applicability of formalin-fixed and formalin fixed paraffin embedded tissues in forensic DNA analysis. J Forensic Sci. 1997;42:708-14.

  19. Pak F, Pyakural P, Kokhaei P, Kaaya E, Pourfathollah AA, Selivanova G, et al. HHV-8/KSHV during the development of Kaposi’s sarcoma: evaluation by polymerase chain reaction and immunohistochemistry. J Cutan Pathol. 2005;32:21-7.

  20. García LA, Rodrigo JP, Sánchez P, Ramos S, Suárez C. Extracción de ADN con resina chelex en el análisis de la amplificación oncogénica en carcinomas de cabeza y cuello. Acta Otorrinolaringol Esp. 2004;55:139-44.

  21. Krishna K, Singh M, Muralidhar M, Kumar A, Chattopadhyaya TK, Kapila K, et al. Comparison of in house polymerase chain reaction with conventional techniques for the detection of Mycobacterium tuberculosis DNA in granulomatous lymphadenopathy. J Clin Pathol. 2000; 53:355-61.




2020     |     www.medigraphic.com