medigraphic.com
A partir del año 2010, la Revista Oficial del INER cambió a NCT (Neumología y Cirugía de Tórax)

 Ver actualización

2009, Número 4

<< Anterior Siguiente >>

Rev Inst Nal Enf Resp Mex 2009; 22 (4)


Purificación, cultivo y caracterización de fibrocitos humanos de sangre periférica

García-de Alba C, Becerril K, Cruz N

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 17
Paginas: 288-294
Archivo PDF: 123.52 Kb.


RESUMEN

Antecedentes: Los fibrocitos son una población de células progenitoras de fibroblastos y miofibroblastos descrita por primera vez en 1994. Coexpresan marcadores de células mesenquimatosas (colágena I), monocitos (CD14), antígeno panleucocitario (CD45) y células troncales hematopoyéticas (CD34). La presencia de fibrocitos ha sido documentada en padecimientos como el asma y la fibrosis pulmonar idiopática. Hasta el momento se sabe muy poco del papel que juegan los fibrocitos en los mecanismos moleculares que generan la fibrosis pulmonar, por lo que es de gran importancia su estudio tanto in vivo como in vitro. Nuestro objetivo fue establecer una técnica y condiciones de cultivo óptimos para obtener cultivos de fibrocitos altamente enriquecidos.
Material y métodos: Se obtuvieron fibrocitos a partir de concentrados leucocitarios por dos métodos diferentes, el primero separándolos por sus propiedades adherentes y el segundo por enriquecimiento de células CD14+. La caracterización se llevó a cabo por citometría de flujo, análisis de síntesis de colágena, cuantificación de colágena en sobrenadantes de los cultivos e inmunocitoquímica para colágena I. Como control positivo se utilizó una línea celular de fibroblastos normales de pulmón.
Resultados: La citometría de flujo mostró que los cultivos de fibrocitos diferenciados a partir de células CD14+ contienen menor porcentaje de células contaminantes (linfocitos B y T) que los cultivos de fibrocitos obtenidos por adherencia. Además de esto, la síntesis de colágena y la concentración de colágena en el medio fue mayor en estos mismos cultivos (CD14+). Por último, las imágenes de inmunocitoquímica mostraron mayor expresión de colágena I en cultivos de fibrocitos diferenciados a partir de células CD14+.
Conclusiones: Nuestros resultados muestran que para obtener cultivos de fibrocitos altamente enriquecidos la mejor técnica es la de separar y cultivar células CD14+.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. Bucala R, Spiegel LA, Chesney J, Hogan M, Cerami A. Circulating fibrocytes define a new leukocyte subpopulation that mediates tissue repair. Mol Med 1994;1:71-81.

  2. Abe R, Donnelly SC, Peng T, Bucala R, Metz CN. Peripheral blood fibrocytes: differentiation pathway and migration to wound sites. J Immunol 2001; 166:7556-7562.

  3. Aiba S, Tagami H. Inverse correlation between CD34 expression and proline-4-hydroxylase immunoreactivity on spindle cells noted in hypertrophic scars and keloids. J Cutan Pathol 1997;24:65-69.

  4. Quan TE, Cowper S, Wu SP, Bockenstedt LK, Bucala R. Circulating fibrocytes: collagen-secreting cells of the peripheral blood. Int J Biochem Cell Biol 2004;36:598-606.

  5. Strieter RM, Gomperts BN, Keane MP. The role of CXC chemokines in pulmonary fibrosis. J Clin Invest 2007;117:549-556.

  6. Postlethwaite AE, Shigemitsu H, Kanangat S. Cellular origins of fibroblasts: possible implications for organ fibrosis in systemic sclerosis. Curr Opin Rheumatol 2004;16:733-738.

  7. Chesney J, Metz C, Stavitsky AB, Bacher M, Bucala R. Regulated production of type I collagen and inflammatory cytokines by peripheral blood fibrocytes. J Immunol 1998;160:419-425.

  8. Hartlapp I, Abe R, Saeed RW, et ál. Fibrocytes induce an angiogenic phenotype in cultured endothelial cells and promote angiogenesis in vivo. FASEB J 2001; 15:2215-2224.

  9. Hong KM, Belperio JA, Keane MP, Burdick MD, Strieter RM. Differentiation of human circulating fibrocytes as mediated by transforming growth factor-beta and peroxisome proliferator-activated receptor-gamma. J Biol Chem 2007;282:22910-22920.

  10. Nihlberg K, Larsen K, Hultgårdh-Nilsson A, Malmström A, Bjermer L, Westergren-Thorsson G. Tissue fibrocytes in patients with mild asthma: a possible link to thickness of reticular basement membrane? Respir Res 2006;7:50.

  11. Schmidt M, Sun G, Stacey MA, Mori L, Mattoli S. Identification of circulating fibrocytes as precursors of bronchial myofibroblasts in asthma. J Immunol 2003;171:380-389.

  12. Mehrad B, Burdick MD, Zisman DA, Keane MP, Belperio JA, Strieter RM. Circulating peripheral blood fibrocytes in human fibrotic interstitial lung disease. Biochem Biophys Res Commun 2007;353:104-108.

  13. Andersson-Sjöland A, de Alba CG, Nihlberg K, et ál. Fibrocytes are a potential source of lung fibroblasts in idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol 2008;40:2129-2140.

  14. Becerril C, Pardo A, Montaño M, Ramos C, Ramírez R, Selman M. Acidic fibroblast growth factor induces an antifibrogenic phenotype in human lung fibroblasts. Am J Respir Cell Mol Biol 1999;20:1020-1027.

  15. Peterkofsky B, Diegelmann R. Use of a mixture of proteinase-free collagenases for the specific assay of radioactive collagen in the presence of other proteins. Biochemistry 1971;10:988-994.

  16. Yurovsky VV. Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand enhances collagen production by human lung fibroblasts. Am J Respir Cell Mol Biol 2003;28:225-231.

  17. Wang JF, Jiao H, Stewart TL, Shankowsky HA, Scott PG, Tredget EE. Fibrocytes from burn patients regulate the activities of fibroblasts. Wound Rep Reg 2007;15:113-121




2020     |     www.medigraphic.com