2022, Número 2
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Rev Cubana Med Trop 2022; 74 (2)
Inactivación del virus Zika con medio de transporte de ácidos nucleicos, potencialmente aplicable a muestras clínicas para el diagnóstico molecular de SARS-CoV-2
Montalvo VMC, Labrada RA, Valdés RO, Álvarez VM, Santana AE, Medero DD, Wilson JC, López HD, Nuñez QL, Sánchez DY, Naranjo GC, Chuairey RW, Aleaga SY, Rodríguez LLA, Guzmán TMG
Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 15
Paginas:
Archivo PDF: 273.53 Kb.
RESUMEN
Introducción:
Los medios de colecta de muestras clínicas con capacidad de desnaturalizar virus reducen los riesgos de contagio durante el transporte y procesamiento.
Objetivo:
Emplear el medio de transporte de ácidos nucleicos (TAN) en muestras de exudado nasofaríngeo colectadas para el diagnóstico de SARS-CoV-2.
Métodos:
Se realizó un estudio experimental para demostrar la capacidad del medio de inactivar la infectividad viral. Se tomó como modelo de virus envuelto el virus Zika (VZk), cuyo nivel de bioseguridad es 2. Se evaluó el desempeño clínico del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Se empleó una cepa del VZk propagada en la línea celular Vero y, previo a la infección de las células, el VZk se puso en contacto a intervalos de tiempo diferentes (2; 15 y 30 min) con el medio TAN puro; y luego se realizaron diluciones seriadas (10-1-10-4). La inactivación viral se evaluó por RT-PCR, en el sobrenadante y células colectadas, al culminar el periodo de propagación. El desempeño clínico del medio TAN se estimó tomando como referencia el CITOSWAB® VTM, en 30 exudados nasofaríngeos colectados para diagnóstico de la infección por SARS-CoV-2.
Resultados:
El VZk preservó su infectividad a diluciones del inóculo ≥ 10-2, independientemente del tiempo de contacto. La sensibilidad y especificidad clínica del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2 fueron del 100 %, respectivamente.
Conclusiones:
Los resultados sugieren que muestras clínicas positivas a VZk en diluciones ≤ 10-1 del medio TAN pueden ser manipuladas de forma segura, lo que pudiera aplicarse potencialmente al diagnóstico molecular del SARS-CoV-2.
REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)
Richard-Greenblatt M, Comar CE, Flevaud L, Berti M, Harris RM, Weiss SR, et al. Copan eNAT transport systemto address challenges in COVID-19 diagnostics in regions with limited testing access. J Clin Microbiol. 2021;59:e00110-21. DOI: https://doi.org/10.1128/JCM.00110-211.
Welch SR, Davies KA, Buczkowski H, Hettiarachchi N, Green N, Arnold U, et al. Analysis of Inactivation of SARS-CoV-2 by Specimen Transport Media, Nucleic Acid Extraction Reagents, Detergents, and Fixatives. J Clin Microbiol. 2020;58(11):e01713-20. DOI: https://doi.org/10.1128/JCM.01713-202.
World Health Organization. Laboratory testing for coronavirus disease (COVID-19) in suspected human cases: interim guidance, 19 March 2020. World Health Organization, 2020b.
Blow J, Dohm DJ, Negley DL, Mores CN. Virus inactivation by nucleic acid extraction reagents. J Virol Methods. 2004;119:195-8. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.03.0154.
Lanciotti RS, Kosoy OL, Laven JJ, Velez JO, Lambert AJ, Johnson AJ, et al. Genetic and Serologic Properties of Zika Virus Associated with an Epidemic, Yap State, Micronesia, 2007. Emerg Infect Dis. 2008;14(8):1232-9. DOI: https://doi.org/10.3201/eid1408.0802875.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd ed. New York. Cold Spring Harbor. 1989; p. 9.14-9.19.
Kochel TJ, Kocher GA, Ksiazek TG, Burans JP. Evaluation of TRIzol LS Inactivation of Viruses. J ABSA Inter. 2017;22(2):52-5.
Yang HJ, Tsou CL. Inactivation during denaturation of Ribonuclease A by Guanidinium Chloride is accompanied by unfolding at the active site. Biochem J. 1995;305:379-384.
Chan SY, Ma MC, Goldsmith MA. Differential induction of cellular detachment by envelope glicoproteins of Marburg and Ebola (Zaire) viruses. J Gen Virol. 2000;83:2155-9.
Ding N, Craik SA, Pang X, Lee B, Neumann NF. Assessing UV Inactivation of Adenovirus 41 Using Integrated Cell Culture Real-Time qPCR/RT-qPCR. Water Envioront Res. 2017;89(4):323-329. DOI: https://doi.org/10.2175/106143017X1483999452302810.
Jureka AS, Silvas JA, Basler CF. Propagation, Inactivation, and Safety Testing of SARS-CoV-2. Viruses. 2000;12:622. DOI: https://doi.org/10.3390/v1206062211.
Amirouche A, Ait-Ali D, Nouri H, Boudrahme-Hannou L, Tliba S, Ghidouche A, et al. TRIzol-based RNA extraction for detection protocol for SARS-CoV-2 of coronavirus disease 2019. New Microb. 2021;41(C):100874. DOI: https://doi.org/10.1016/j.nmni.2021.10087412.
Carvalho AF, Gonçalves AP, Souza TB, Sato HT, Vuitika L. The use of denaturing solution as collection and transport media to improve SarS-CoV-2 RNA detection and reduce infection of laboratory personnel. MedRxiv preprint. 2020. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.06.18.2013430413.
Daum LT, Choi Y, Worthy SA, Rodriguez JD, Chambers JP, Fischer GW. A molecular transport medium for collection, inactivation, transport, and detection of Mycobacterium tuberculosis. Int J Tuberc Lung Dis. 2014;18(7):847-9.
Schlaudecker EP, Heck JP, MacIntyre ET, Martinez R, Dodd CN, McNeal MM, et al. Comparison of a new transport medium with universal transport medium at a tropical field site. Diagn Microbiol Infect Dis. 2014;80(2):107-10. DOI: https://doi:10.1016/j.diagmicrobio.2014.05.01815.