Zaidenberg A, Tournier HA, Schinella GR , Buschiazzo HO

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 20
Paginas: 21-26
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RESUMEN

El presente trabajo describe un protocolo para la obtención de poblaciones puras y estables de amastigotes extracelulares de Trypanosoma cruzi. El mismo está basado en un mecanismo de selección de estadios por efectos combinados de cambios térmicos y presencia de plasma humano en el medio de incubación. Epimastigotes (clon Bra C15C2) se incubaron a 27°C durante 96 h y subcultivados cada 96 h a 36.5°C en el medio definido F69. Luego de 3 subcultivos a 36.5°C y posterior incubación en presencia de 5% de plasma humano normal durante el mismo lapso, se obtuvo una población de parásitos constituida principalmente por amastigotes que pudo ser mantenida durante tiempo indefinido por subcultivos en medios F69 y F29. Los estudios morfológicos de dichos amastigotes mostraron estructuras similares a los obtenidos por otros métodos. La cinética de crecimiento de amastigotes dependió de la temperatura de incubación y del medio de cultivo utilizado (F29 ó infusión cerebro corazón BHI). La incubación en el medio F29 a 27°C mostró las fases pre-exponencial y logarítmica de 72-96 h y 24-48 h respectivamente. Se obtuvieron resultados similares utilizando el medio BHI. Cultivos con o sin recambio de medio, sufrieron transformación a epimastigotes al cabo de 16 días. A 36.5°C, la cinética de crecimiento en el medio F29 fue similar, aunque no se observó transformación a epimastigotes. El medio BHI no fue apto para el crecimiento de amastigotes a esta temperatura. En tanto, el F29, por subcultivos, permitió el mantenimiento de amastigotes con una pureza superior al 99% durante tiempo indefinido.

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